Detektion und Charakterisierung endogener antisense RNA des ß1- adrenergen Rezeptors

Abstract

Die Untersuchungen der vorliegenden Arbeit dienen der Erweiterung des Verständnisses der mo-lekularen Vorgänge bei chronischer Herzinsuffizienz. Im Fokus steht die Untersuchung eines Teilaspekts der katecholamininduzierten ß-adrenergen Signaltransduktion, der Downregulation des ß1-adrenergen Rezeptorproteins am Beispiel von Patienten mit Dilatativer Kardiomyopathie (DCM). In der vorliegenden Arbeit wurde mittels RT-PCR endogene antisense RNA für den ß1-adrenergen Rezeptor im Myokardgewebe der Ratte und des Menschen sowie in neonatalen Kardiomyozyten der Ratte nachgewiesen. Die antisense RNA erstreckt sich fast über die gesamte cDNA des ß1-adrenergen Rezeptors. Ihre Sequenz ist zur sense RNA vollständig komplementär, polyadenyliert und formt RNA-RNA Duplexe mit der zugehörigen sense RNA. Endogene anti-sense RNA wurde im zytoplasmatischen und im nukleären Zellkompartiment detektiert. Im insuffizienten Myokard konnte für die antisense RNA keine Veränderung der Menge im Ver-gleich zu herzgesunden Kontrollen dokumentiert werden. Auch die Ratio aus antisense und sense RNA war bei Patienten unverändert im Vergleich zu herzgesunden Kontrollen. Die Hypothese, nach welcher eine Tendenz von inversen Mengen antisense und sense RNA bei DCM-Patienten und Kontrollen nachweisbar wäre, bestätigte sich damit nicht. In einem In vitro- Transkriptions-/ Translations-Essay wurde modellhaft eine Inhibition der Translation von Proteinstrukturen des ß1-adrenergen Rezeptors durch antisense Oligonukleotide in Abhängigkeit von deren Konzentration und Sequenz nachgewiesen. Aus diesen Ergebnissen ergeben sich Hinweise darauf, dass endogene antisense RNA unabhängig von deren Menge einen Einfluss auf die Downregulation des ß1-adrenergen Rezeptors haben könnte.