dc.contributor.author
Horn, Sabine
dc.date.accessioned
2018-06-07T23:56:53Z
dc.date.available
2004-07-13T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/11227
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-15425
dc.description
Titelblatt
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
2 Material und Methoden 28
3 Ergebnisse 57
4 Diskussion 87
5 Literaturverzeichnis 110
6 Abkürzungsverzeichnis 126
7 Zusammenfassung 128
8 Summary 129
9 Danksagung 130
dc.description.abstract
Die dilatative Kardiomyopathie (DCM) ist eine Herzmuskelerkrankung, die
gekennzeichnet ist durch fortschreitende Senkung der myokardialen
Kontraktilität und der ventrikulären Dilatation (Richardson et al., 1995). Die
Ursachen sind zum einen idiopathisch, genetisch, viral, autoimmun oder
immunbedingt, assoziiert mit einer viralen Infektion (Caforio et al., 2002).
Die Arbeit wurde in zwei Bereiche unterteilt, wobei es sich zum einen um die
Verifizierung und zum anderen um die Identifizierung von Targets, die an der
DCM beteiligt sein könnten, handelt. Im ersten Teil der Arbeit wurden gegen
Gene, die bei DCM-Patienten differentiell exprimiert wurden, Antikörper über
Phage Display Technologie selektiert. 26 Gene wurden hierzu in einen
Expressionsvektor kloniert. Davon konnten 12 Proteine exprimiert und nativ in
E. coli aufgearbeitet werden. Gegen sechs der Proteine ließen sich Phagen-
Antikörper mittels Phage Display isolieren. Die Phagenantikörper wurden auf
Western-Blots mit isolierten Proteinen aus Mausgeweben getestet. Hierbei
zeigten die untersuchten Phagenantikörper eine hohe Kreuzreaktivität. In der
weiteren experimentellen Phase wurden Proteine potentiell relevanter
Autoantigene, der autoimmunen DCM, durch Plasmascreening identifiziert. Dazu
wurden in einem ersten Schritt Plasmen von DCM-Patienten auf einer humanen
fötalen Expressionsbibliothek, die 37.830 redundante Expressionsklone
enthielt, untersucht. Es konnte ein Subset von 48 Proteinen identifiziert
werden, die durch einen humanen IgG-Antikörper detektiert wurden, sowie ein
Subset von 32 IgG3 spezifischen Proteinen. Diese Subsets wurden anschließend
für eine qualitative und quantitative Auswertung in aufgereinigter Form auf
Proteinchips aufgebracht und mit den zuvor verwendeten DCM-Plasmen untersucht.
Dabei konnten bei den Versuchen mit IgG sechs, bzw. bei den IgG3-Versuchen
sieben Proteine identifiziert werden, die sich nach bild- und
datenanalytischer Auswertung von den gesunden Kontrollen abhoben. Die
identifizierten Proteine FADD, BAT3 und Tubulin wurden schon bei anderen
Autoimmunerkrankungen beschrieben, sind aber bisher noch nicht in Verbindung
mit der DCM gebracht worden. Weiterhin wurden auch neue Proteine identifiziert
wie das Protein KChIP1, Ma3, Cyclin G1, RAD23 oder die Histon-Deacetylase3.
Der vielversprechendste Kandidat scheint das KChIP-Protein zu sein, da es bei
9 von 10 Patienten identifiziert werden konnte und eine wichtige Funktion bei
der Erregungsleitung im Herzen besitzt. Störungen dieser Proteine können zu
ventrikulären Tachykardien und Arrhythmien führen.
de
dc.description.abstract
Dilated cardiomyopathy (DCM) is a heart muscle disease characterised by
impaired dilation and contraction of the left ventricle or both (Richardson,
1995). Twenty percent of DCM belongs to the familiar/genetic form, the rest
may be idiopathic, viral, auto-immune or immune-mediated associated with a
viral infection (Caforio et al., 2002). The present work is divided into two
parts. The first part shows the screening of phage antibodies to allow
verification of previously identified targets. The following part of the work
combines an expression library with protein array technology to identify new
putative disease relevant auto-antigens. First, antibodies were selected
against differential expressed genes of DCM patients using phage display. 27
genes were cloned in an expression vector, followed by successful expression
and purification of twelve of these genes. Phage antibodies against six of
these recombinant expressed gene products have been selected. The incubation
of these phage antibodies against protein extracts from mouse shows high cross
reactivity. In the second part of the current work, we profile the auto-
antibody repertoire of DCM patients of the auto-immune subtype. First, we
screened a human high density protein array containing 37,500 recombinant
proteins deriving from a human fetal brain expression library with plasma. A
subset specific for IgG consisting of 48 proteins and a subset specific for
the IgG3 subtype containing 32 proteins has been identified. Following high-
throughput expression and purification, protein microarrays were generated and
incubated with the previously used patient and control plasmas. Following
image and data analysis, significant differences between patient and control
plasmas have been determined for six proteins on the IgG specific and seven
genes on the IgG3 subtype specific protein microarray. We have identified new
proteins such as KChIP1, Ma3, cyclin G1, RAD23 and the histone deacetylase 3
as putative specific for DCM, as well as the proteins FADD, BAT3 and tubulin
which have been additionally described in other auto-immune diseases. The
potassium channel interacting protein 1 (KChIP1) was detected in 9 of 10
patient plasmas. Regarding its function in transient outward current and that
defects in the highly homologous KChIP2 protein causes arrhythmias and
ventricular tachycardia by absence of the transient outward current, KChIP1
seems to be a very promising candidate.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
autoantibodies
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Generierung von Antikörpern gegen differentiell exprimierte Gene bei der
idiopathischen dilatativen Kardiomyopathie und die Identifizierung von
Autoantigenen des autoimmunen Subtyps
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Hans Lehrach
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Volker A. Erdmann
dc.date.accepted
2004-05-26
dc.date.embargoEnd
2004-07-23
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-2004001767
dc.title.translated
Generation of antibodies against differential expressed genes of the
idiopathic dilative cardiomiopathy and the identification of autoantigenes of
the autoimmune subtype
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000001301
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2004/176/
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000001301
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access