dc.contributor.author
Kirsanovs, Sina
dc.date.accessioned
2018-06-07T23:45:36Z
dc.date.available
2010-07-30T07:33:38.702Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/10939
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-15137
dc.description.abstract
Hantaviruses possess a tri-segmented negative-stranded RNA genome with the
potency of genetic reassortment. Reassortment processes between genome
segments might cause dramatic changes in the virulence of viruses as has been
shown for influenza viruses. The European Dobrava-Belgrade virus species
(DOBV) forms distinct lineages associated with different Apodemus mice species
and can cause hemorrhagic fever with renal syndrome of different clinical
severities. In this study, virological and molecular tools to monitor RNA
reassortment in cell culture between two genetic lineages of DOBV were
established. Representatives of the DOBV-Af (associated with A. flavicollis)
and DOBV-Aa (associated with A. agrarius) lineages were used for dual
infection of Vero E6 cells. Two hundred and seven individual virus clones were
isolated and screened for reassortment by a newly established strain- and
segment-specific multiplex PCR (MP PCR). After co-infection, as much as 31% of
virus progeny population was represented by genetically stable reassortants.
Reassortment was proven by sequence analyses of the complete S and M segments
as well as L-ORF. Two stable reassortment patterns where identified. In all
cases, S and L segments originated from the same parental strain and only the
M segment was exchanged. Since the different virulence of DOBV-Aa vs. DOBV-Af
in humans could be associated with the two viruses´ different abilities to
modulate the innate immune response of the host; Three “read-out markers”
(physiological role of RIG-I on virus replication, induction of the interferon
stimulated response element and of the antiviral MxA protein) after virus
infection were investigated. Clear differences to modulate these parameters of
innate immune responses were found between DOBV-Aa on the one hand and DOBV-Af
on the other. These two different phenotypes were reflected by the two types
of reassortants carrying the respective S and L segments of the parental
virus. The differential induction/modulation of innate immune responses might
represent an important determinant of (different) virulence of hantaviruses in
the human organism.
de
dc.description.abstract
Hantaviren besitzen ein in drei Segmente gegliedertes, einzelsträngiges RNA
Genom in Negativstrangorientierung. Aufgrund der Segmentierung besteht die
Möglichkeit des genetischen Reassortment. Genetisches Reassortment zwischen
Genomsegmenten verschiedener Viren kann zu dramatischen Veränderungen der
Virulenz führen, wie es für Influenzaviren beschrieben ist. Die europäische
Virus Spezies Dobrava-Belgrad (DOBV) bildet, assoziiert mit verschiedenen
Apodemus Spezies, verschiedene genetische Linien und verursacht
hämorrhagisches Fieber mit renalem Syndrom mit verschieden schweren klinischen
Verläufen. In dieser Doktorarbeit wurden virologische und molekularbiologische
Methoden etabliert um genetisches Reassortment zwischen zwei genetischen DOBV-
Linien in Zellkultur nachzuweisen und zu untersuchen. VeroE6 Zellen wurden mit
Vertretern der genetischen Linien DOBV-Af und DOBV-Aa ko-infiziert. Insgesamt
wurden 207 Virusklone isoliert und mittels einer neu etablierten stamm- und
segmentspezifischen Multiplex-PCR analysiert. Es wurden 31% der isolierten
Virusklone als genetisch stabile Reassortanten identifiziert. Das genetische
Reassortment wurde durch Sequenzanalysen des kompletten S und M Segments und
des kompletten open reading frame des L Segments bestätigt. Es wurden nur zwei
stabile Reassortmentmuster gefunden; in beiden Fällen stammten das S and L
Segment von dem gleichen Elternstamm, während das M Segment ausgetauscht war.
Die unterschiedliche Virulenz von DOBV-Aa gegenüber DOBV-Af im Menschen könnte
mit der Fähigkeit beider Viren korrelieren, das angeborene Immunsystem
unterschiedlich zu modulieren. Drei „Read Out Marker“, die physiologische
Rolle von RIG-I für das Wachstum von Hantaviren, sowie die Aktivierung des
„interferon stimulated response Element“ und die Induktion des antiviralen MxA
Proteins, wurden untersucht. Anhand dieser Parameter wurden klare Unterschiede
in der Modulierung der angeborenen Immunantwort durch DOBV-Aa auf der einen
Seite und durch DOBV-Af auf der anderen Seite gefunden. Diese beiden
Phänotypen wurden durch die Reassortanten, die das S und L Segment des
jeweiligen Elternvirus trugen, bestätigt. Die unterschiedliche Beeinflussung
der angeborenen Immunantwort kann eine mögliche Determinante der Virulenz von
Hantaviren im menschlichen Organismus aufzeigen.
de
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
genetic reassortment
dc.subject
innate immunity
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Genetic reassortment between members of different Dobrava-Belgrade virus
lineages and allocation of innate immune response modulation to praticular
genome segments
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med. D. H. Krüger
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. H.-W. Presber
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. R. Ulrich
dc.date.accepted
2010-09-03
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000017949-9
dc.title.translated
Genetisches Reassortment zwischen verschiedenen Dobrava-Virus Linien und die
Zuweisung der jeweiligen Genomsegmente zur Modulation des angeborenen
Immunsystems
de
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000017949
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000011822
dcterms.accessRights.dnb
free
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open access