dc.contributor.author
Gericke, Beate
dc.date.accessioned
2018-06-07T23:31:22Z
dc.date.available
2008-07-23T09:25:57.366Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/10591
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-14789
dc.description.abstract
Transthyretin ist ein multifunktionales Protein, welches hauptsächlich
hinsichtlich seiner Rollen als Transportprotein, negatives Akutphasenprotein,
biochemischer Marker, Enzym und als Komponente amyloidogener Prozesse bekannt
ist. In der vorliegenden Dissertation soll der komplexe Zusammenhang von
funktionellen und diagnostischen Aspekten in der TTR-Forschung dargestellt
werden und dabei die Mikroheterogenität des Protein im Rahmen von drei
Publikationen in den Vordergrund gestellt werden. Die erste Studie befasst
sich mit der intrafollikuläre Eizellreifung während hormoninduzierter
Superovulation (P1), eine weitere mit dem Ovarialkarzinom (P2) und die dritte
mit polytraumatisierten Patienten (P3). Methodisch wurde nach einer
Immunopräzipitation die massenspektrometrische Analytik genutzt, um die
Qualität des Proteins abbilden zu können, für die quantitative Bestimmung von
TTR wurde ein ELISA zur Anwendung gebracht. Die vier Hauptpeaks (natives TTR,
S-cysteinyliertes TTR, S-cysteinylglyciniertes TTR und S-glutathionyliertes
TTR) konnten in Serum, Follikelflüssigkeit und Aszites detektiert werden (P1,
P2, P3). Eine vermehrte Dominanz des S-cysteinylglycinierten TTR konnte
innerhalb der ersten 24 Stunden nach einem Trauma nachgewiesen werden (P3).
Die Serumkonzentrationen von TTR sind assoziiert mit den CRP-Konzentrationen
(P2, P3). Gesunde Kontrollen und Patienten unterscheiden sich hinsichtlich
ihres Serumgehaltes an TTR (P2, P3). Posttranslationale Modifikationen des TTR
treten am freien Cysteinrest in Position 10 des monomeren TTR (Cys10) auf12,13
und konnten sowohl in Serum und FF hormonstimulierter Frauen (P1), als auch in
Serum und Aszites von Frauen mit einem Ovarialkarzinom (P2) und im Serum von
Patienten nach einem Polytrauma (P3) nachgewiesen werden. Solche
Modifikationen können Interaktionen mit anderen Plasmaproteinen
beeinträchtigen und Einfluss auf Rezeptorbindung, Gewebeaufnahme, Abbau und
Ausscheidung des Proteins nehmen. Bereits in früheren Studien wurde ein
Zusammenhang zwischen Modifikationen der Mikroheterogenität von TTR und
oxidativem Stress hergestellt. Die funktionellen Konsequenzen der passageren
Änderungen des TTR-Moleküls nach einem Polytrauma sind derzeit noch unklar, es
ist aber mit Spätfolgen zu rechnen. Kürzlich wurde eine Veränderung des Ratios
von nativem TTR zu cysTTR als hilfreich für die Diagnose von Alzheimer
postuliert. Weiterhin ist bewiesen, dass Modifikationen, wie sie bei den
Polytraumapatienten beschrieben werden konnten, die Amyloidogenität von TTR
beeinflussen. Zusammenfassend kann durch die drei Studien belegt werden, dass
in jedem Fall posttranslationale Modifikationen am TTR Molekül auftreten, dass
die Mikroheterogenität des Proteins in den verschiedenen untersuchten
Körperflüssigkeiten identisch ist, und dass ein akuter oxidativer Stress
Veränderungen im TTR-Molekül induziert, während diese beim Ovarialkarzinom
nicht beobachtet werden konnten.
de
dc.description.abstract
Proteins and peptides in human follicular fluid (FF) are from plasma or
produced by follicular structures. Composition changes reflect oocyte
maturation and can be used as diagnostic markers. Aim of the study was to
determine protein and peptide pattern of paired serum and FF samples of women
undergoing IVF. METHODS: Surface enhanced laser desorption and ionization-time
of flight-mass spectrometry (SELDI-TOF-MS) was used to obtain characteristic
protein pattern. RESULTS: 186 individual mass signals were obtained from a
combination of enrichment on strong anion exchanger (110), weak cation
exchanger (52) and normal phase surfaces (24). Based on molecular masses,
isoelectric points and immunoreactivety, four signals were identified as
haptoglobin, haptoglobin 1 and transthyretin (TTR). Immunological and MS
characteristics of the TTR:retinol-binding protein transport complex revealed
no microheterogeneity differences between serum and FF. Discriminatory pattern
based on decision-tree-based classification and regression analysis
distinguished between serum and FF with a sensitivity and specifity of 100%.
CONCLUSION: Quantitative and qualitative differences indicate selective
transport processes rather than mere filtration across the blood-follicle-
barrier. Identified proteins as well as characteristic peptide and/or protein
signatures might emerge as potential candidates for diagnostic markers of
follicle and/or oocyte maturation and thus oocyte quality. Background:
Transthyretin (TTR), a traditional biomarker for nutritional and inflammatory
status exists in different molecular variants of yet unknown importance. A
truncated form of TTR has recently been described to be part of a set of
biomarkers for the diagnosis of ovarian cancer. The main aim of the study was
therefore to characterize differences in microheterogeneity between ascitic
fluid and plasma of women affected with ovarian cancer and to evaluate the
tumor site as the possible source of TTR. Methods: Subjects were 48 women with
primary invasive epithelial ovarian cancer or recurrent ovarian carcinoma. The
control group consisted of 20 postmenopausal women. TTR and retinol-binding
protein (RBP) levels were measured by enzyme-linked immunoassay (ELISA) and
C-reactive protein (CRP) levels by a high-sensitivity latex particle
turbidimetric assay. The molecular heterogeneity of TTR was analysed using
immunoprecipitation and matrix-associated laser desorption ionization time-of-
flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). Presence of TTR in tumor tissue was
determined with indirect peroxidase immunostaining. Results: TTR and RBP
(µg/ml) levels in serum were 148.5 ± 96.7 and 22.5 ± 14.8 in affected women
compared to 363.3 ± 105.5 and 55.8 ± 9.3 in healthy postmenopausal women (p <
0.01). In ascitic fluid, levels were 1.02 ± 0.24 and 4.63 ± 1.57 µg/ml,
respectively. The mean levels of TTR and RBP in serum showed a tendency to
decrease with the severity of the disease and were lower in affected women
whose CRP levels were > 40 mg/ml (p = 0.08 for TTR; p < 0.05 for RBP). No
differences in TTR microheterogeneity were observed between TTR isolated from
serum of affected and healthy women or from ascitic fluid. TTR occurred rather
consistently in four variants. Mass signals were at 13758 ± 7, 13876 ± 13
(greatest intensity), 13924 ± 21 and 14062 ± 24 Da, representing native,
S-cysteinylated, S-cysteinglycinylated and glutathionylated TTR, respectively.
Serum of healthy and affected women as well as ascitic fluid contained the
truncated fragment of TTR (12828 ± 11 Da). No immunoreactive TTR was observed
in the tumor sites. Conclusion: The severity of the cancer associated
catabolism as well as the inflammation status affect serum TTR and RBP levels.
Neither TTR nor its truncated form originates from tumor tissue and its
occurrence in ascites may well reflect the filtration from blood into ascitic
fluid. Transthyretin (TTR) which exists in different isoforms, is a valid
marker for acute phase response and subclinical malnutrition. The aim of the
study was to investigate the relationship between inflammation, oxidative
stress and the occurrence of changes in microheterogeneity of TTR. A
prospective, observational study at a level-I trauma center of a large urban
medical university was performed. Patients were severely injured (n=18; injury
severity score (ISS): 34-66), and were observed within the first 24 hours as
and over the following days until day 20 after injury. 20 healthy subjects,
matched by age and sex, were used as controls. TTR was enriched by
immunoprecipitation. Microheterogeneity of TTR was determined by linear matrix
assisted laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry (MALDI-
TOF-MS). Four major mass signals were observed for TTR representing native,
S-cysteinylated, S-cysteinglycinylated and S-glutathionylated TTR,
respectively. In the course of their ICU stay, 14 out of 18 patients showed a
transient change in microheterogeneity in favour of the S-cysteinglycinylated
form of TTR (p < 0.05 vs. controls). The occurrence of this variant was not
associated with the severity of trauma or the intensity of the acute-phase
response, but was associated with oxidative stress as evidenced by Trolox. Our
results demonstrate that changes in microheterogeneity of TTR occur in a
substantial number of ICU trauma patients. The diagnostic values of this
changes remains to be elucidated. It is speculated that TTR modification may
well be the mechanism underlying the morphological manifestation of amyloidose
or Alzheimer’s diseases in patients surviving multiple trauma.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Diagnostische und funktionelle Bedeutung der Mikroheterogenität von
Transthyretin
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med. U. Kaisers
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. J. Weimann, PD Dr. H. Rawel
dc.date.accepted
2008-07-14
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000004415-8
dc.title.translated
Diagnostic and functional importance of transthyretin microheterogeneity
en
dc.title.translatedsubtitle
Diagnostic and functional importance of transthyretin microheterogeneity
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000004415
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000004041
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access