Charakterisierung und Validierung von infektionsserologischen Laborparametern für den Nachweis des Humanen Immundefizienz-Virus, des Hepatitis-B-Virus und des Hepatitis-C-Virus aus postmortalem Blut

Abstract

Die Gefahr der Virusübertragung durch allogene Gewebetransplantationen stellt auch weiterhin eine der Hauptgefahren bei der Anwendung von Gewebezubereitungen in der klinischen Medizin dar. Serologische und molekulargenetische Untersuchungen auf klinisch relevante Viren im Rahmen der Eignungsprüfung von Gewebespendern werden bevorzugt mittels prämortaler Blutproben durchgeführt. Diese stehen jedoch häufig nicht, bzw. nicht in ausreichender Menge, zur Verfügung. Die derzeitige Gesetzeslage (EU-Richtlinie 2006/17/EG, TPG-GewV) legt das postmortale Blutentnahmeintervall bei Gewebespendern auf maximal 24 Stunden fest, sodass viele potentielle Spender ausgeschlossen werden müssen. Des Weiteren unterliegt die Testung postmortaler Blutproben besonderen Anforderungen. So sollten die verwendeten infektionsserologischen bzw. NAT-Teste auch für postmortale Proben validiert sein. Ebenso ist wenig über die Stabilität von Antigenen und Antikörpern für HIV, HBV und HCV im postmortalen Verlauf bekannt. Aufgrund der dargestellten Problematik wurde in drei unterschiedliche Studien das Verhalten postmortaler Blutproben in Bezug auf infektionsserologische Parameter für HIV-, HBV- und HCV- Infektionen untersucht. In einem retrospektiven Vergleich prä- und postmortaler infektionsserologischer Testergebnisse (HIV, HBV, HCV, TPLA) von 487 Hornhautspendern konnte gezeigt werden, dass es eine sehr hohe Übereinstimmung zwischen den Ergebnissen postmortalen Blutes und einer prämortalen Laborrückstellprobe desselben Gewebespenders gibt. Es ergaben sich insgesamt 21 Diskrepanzfälle, die sich auf alle getesteten Parameter verteilten. Während falsch positive infektionsserologische Ergebnisse aufgrund präanalytischer Probleme häufiger sind (3,3%), stellen falsch negative Ergebnisse eine Ausnahme dar (1%). Umso wichtiger ist daher die Validierung von Testsystemen für die Bestimmung infektionsserologischer Parameter aus postmortalem Blut. In einer Spikingstudie konnte durch das Spiken 20 postmortaler Blutproben von Augenhornhautspendern mit definierten PEI/WHO- Standards (Anti-HIV 1/2, HBsAg, Anti-HBc, Anti-HCV) eine erfolgreiche Validierung eines etablierten Testsystems für die infektionsserologische Routinediagnostik von Lebendblutproben (Siemems-BEP-III-Automatensystem) für postmortale Blutproben durchgeführt werden. Alle ungespikten Proben, sowie alle Negativkontrollen, wurden als richtig negativ und alle gespikten Proben sowohl in der niedrigen als auch der hohen Konzentration als richtig positiv bewertet. Die letzte Testreihe stellte eine prospektive Untersuchung des Verlaufs serologischer Parameter für HIV-, HBV- und HCV-Infektionen bei 30 Verstorbenen mit diesen Infektionskrankheiten dar. Dabei konnte eine Antigen- bzw. Antikörperstabilität dieser Infektionskrankheiten bis zu 48 Stunden postmortem nachgewiesen werden. Die Ergebnisse der drei Untersuchungen sprechen für eine denkbare Erhöhung des postmortalen Blutentnahmeintervalls von 24 auf 36 oder sogar 48 Stunden.

The risk of viral transmission by allogeneic tissue transplantation remains one of the main dangers in the use of tissue preparation in clinical medicine. Serological and virological investigations on clinically relevant viruses are a part of the ability test of tissue donors. These investigations are performed, preferably, on pre-mortal blood samples. Pre-mortal samples are not frequently available, or, if available, not in sufficient quantity. Current legislation (EU Directive 2006/17/EC, TPG GeWV) determines the post-mortem interval in blood collection of tissue donors to be not more than 24 hours. This results in exclusion of many potential tissue donors. Furthermore, the testing of post-mortem blood samples is subject to particular requirements. Therefore, the serological and PCR tests to be performed should be validated for post-mortem samples. Likewise, there is little known about the stability of antigens and antibodies for HIV, HBV and HCV in post-mortem samples. Based on this described set of challenges, the behaviour of post-mortem blood samples in relation to serological parameters for HIV-, HBV- and HCV- infections was investigated in three different studies. In a retrospective comparison, pre- and post-mortal serological test results for HIV, HBV, HCV and TPLA of 487 cornea donors showed a very high correlation between the results of a pre-mortal reference sample and post-mortem blood of the same tissue donor. There was a total of 21 discrepancies, which were distributed across all tested parameters. While false-positive serological test results due to pre-analytical problems occur more frequently (3.3%), false-negative results are an exception (1%). Therefore, the importance of the validation of test systems for serological determinations of post-mortem blood samples increases. In a follow-up investigation, 20 post-mortem blood samples from cornea donors were spiked with defined PEI/WHO standards (anti-HIV 1/2, HBsAg, anti-HBc, anti-HCV). This results in a successful validation of an established test system (Siemens BEP-III automatic system for serological routine diagnosis of pre-mortal blood samples) for the investigation of post-mortem blood samples. All unspiked samples, and all negative controls were evaluated as true negative, and all spiked samples in both the low and the high concentration as true positive. The last test series presented a prospective study of the progression of serological parameters for HIV-, HBV- and HCV- infections among 30 dead persons with these infections over time. Stability of antigens or antibodies for the tested infections was detected up to 48 hours post-mortem. The results of the three described analyses support a possible increase of the post-mortem blood sampling interval from 24 to 36, or even, 48 hours.