dc.contributor.author
Schwierk, Viktoria Maria
dc.date.accessioned
2018-06-07T22:15:26Z
dc.date.available
2011-07-27T12:43:33.571Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/9056
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-13255
dc.description.abstract
Tumor necrosis factor α (TNFα) is a cytokine that is mainly produced by
macrophages and monocytes. It is a member of a large family of proteins, the
TNF family. A lot of research in different species has been undertaken
regarding the usefulness of this protein as a marker for a variety of
diseases. The aim of this study was to develop a simple, reproducible protocol
for the purification of recombinant feline TNFα from modified Escherichia
coli, the partial characterization of the rfTNFα protein, the production of
anti-rfTNFα antibodies, as well as the development and analytical validation
of an ELISA for the measurement of feline TNFα in serum from cats. We also
aimed to measure serum fTNFα concentrations in cats with chronic
enteropathies. An efficient and reproducible protocol for the purification of
rfTNFα from Escherichia coli, modified to express fTNFα was established. The
specific absorption and the molecular weight of the protein were evaluated. An
ELISA for the measurement of fTNFα concentrations in serum from cats was
developed and analytically validated. A reference interval was established by
determination of the central 95th percentile in a group of 20 healthy cats.
Lastly, serum concentrations of fTNFα in cats with chronic enteropathies were
evaluated. The specific absorbance of rfTNFα was found to be 1.75. The
relative molecular mass was estimated at 16.93 and 17.57 kDa for 2 isoforms of
rfTNFα. The N-terminal amino acid sequences for both isoforms of the protein
were found to be R-T-P-S-D-K-P-V-A-H-V and SS- S-R-T-P-S-D-K-P-V,
respectively. Both sequences showed 100% homology with the amino acid sequence
of mature feline TNFα, as predicted by the nucleotide sequence of the protein.
The isoelectric point of rfTNFα was estimated at approximately 5.3. The ELISA
for the measurement of serum concentrations of fTNFα in cats was determined to
be sufficiently sensitive, linear, accurate, precise, and reproducible for
clinical use. The reference interval for fTNFα in serum from healty cats was
established at <223.5 ng/l. Feline TNFα was only detectable in 33.3% of cats
with chronic enteropathies. In conclusion, a sensitive, linear, accurate,
precise, and reproducible assay for the measurement of TNFα in cat serum was
developed. Further studies are needed to explore if serum fTNFα concentrations
could serve as a useful marker for the diagnosis, staging, and monitoring of
feline patients with chronic enteropathies.
de
dc.description.abstract
Tumor Nekrose Faktor α (TNFα) ist ein Zytokin, welches hauptsächlich von
Makrophagen und Monozyten produziert wird. Das Protein gehört zu einer
gröβeren Proteinfamilie, der TNF-Familie. Es wurden zuvor viele Untersuchungen
an verschieden Spezies durchgeführt, um den Nutzen des Proteins als Marker für
unterschiediche Erkrankungen zu evaluieren. Ziel dieser Studie war es, ein
einfaches, reproduzierbares Protokoll für die Reinigung von rekombinantem
felinem TNFα (rfTNFα) aus modifizierten Escherichia coli zu etablieren, das
rfTNFα-Protein teilweise zu charakterisieren, anti-rfTNFα-Antikörper zu
produzieren und einen ELISA für das Messen von Serumkonzentrationen von
felinem TNFα in Proben von Katzen zu entwickeln und zu validieren. Des
Weiteren sollten Serum-fTNFα- Konzentrationen von Katzen mit chronischen
Enteropathien bestimmt werden. Ein effizientes, reproduzierbares Protokoll für
die Reinigung von rfTNFα aus modifizierten Escherichia coli wurde angefertigt.
Der Extinktionskoeffizient, sowie die relative molekulare Masse des Proteins
wurden bestimmt. Ein ELISA für das Messen von fTNFα- Konzentrationen in
Katzenserum wurde entwickelt und validiert und ein Referenzbereich wurde durch
die Bestimmung von Serumkonzentrationen von TNFα bei einer Gruppe von 20
gesunden Katzen bestimmt. Zudem wurde die Serumkonzentration von fTNFα bei
Katzen mit chronischen Enteropathien gemessen. Ein Extinktionskoeffizient von
1,75 wurde für rfTNFα ermittelt. Die relative molekulare Masse zweier
Isoformen von rfTNFα war 16,93 bzw. 17,57 kDa. Die N-terminale
Aminosäurensequenz der beiden Isoformen des Proteins war R-T-P-S-D-K-P-V-A-H-V
und S-S-S-R-T-P-S-D-K-P-V. Beide Sequenzen zeigten eine 100%ige Homologie zu
der Aminosäurensequenz von felinem TNFα, welche mit Hilfe der bekannten
Nukleotidsequenz des Proteins ermittelt worden war. Der isoelektrische Punkt
von rfTNFα liegt bei etwa 5,3. Der ELISA für das Messen von fTNFα-
Serumkonzentrationen bei Katzen war ausreichend sensitiv, linear, akkurat,
präzise und reproduzierbar, um klinisch anwendbar zu sein. Das
Referenzintervall von fTNFα bei gesunden Katzen betrug <223,5 n/l. Messbare
Konzentrationen von fTNFα fanden sich nur bei 33,3% der Katzen, welche an
chronischer Enteropathie litten.
de
dc.format.extent
VIII, 124 S. , S. A - E
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Tumour necrosis factor
dc.subject
intestinal diseases
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::630 Landwirtschaft::630 Landwirtschaft und verwandte Bereiche
dc.title
Development and analytical validation of an enzyme-linked immunosorbent assay
for the measurement of feline tumor necrosis factor alpha in serum
dc.contributor.firstReferee
Univ.-Prof. Dr. B. Kohn
dc.contributor.furtherReferee
Univ.-Prof. Dr. J. M. Steiner
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. J. Raila
dc.date.accepted
2011-03-17
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000023719-3
dc.title.translated
Entwicklung und Validierung eines Enzyme-linked Immunosorbent Assays zum
Messen von felinem Tumornekrosefaktor alpha in Serum
de
refubium.affiliation
Veterinärmedizin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000023719
refubium.note.author
Mensch und Buch Verlag
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000009688
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access