dc.contributor.author
Hirche, Christoph
dc.date.accessioned
2018-06-07T19:01:13Z
dc.date.available
2009-06-03T05:58:55.039Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/5665
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-9864
dc.description.abstract
Hintergrund: VEGFR-3 besitzt als Bindungsstelle für die lymphangiogenen
Faktoren VEGF-C und VEGF-D eine entscheidende Bedeutung für physiologische
Prozesse der Lymphangiogenese während der Embryogenese. Die Bedeutung von
VEGFR-3 für die Regulation der Lymphangiogenese wurde durch die Assoziation
mit pathogenetischen Schritten der Tumorgenese und Metastasierung
verdeutlicht, in denen eine vermehrte Expression in einer Vielzahl solider
Tumoren nachgewiesen wurde. Während für andere Vertreter der VEGF-/VEGFR-
Familie bereits Transkriptionsfaktoren und entscheidende regulative Elemente
der transkriptionellen Regulation beschrieben worden sind, fehlen für das
vegfr-3 Gen trotz seiner großen Bedeutung für lymphangiogenetische Prozesse
wesentliche Kenntnisse über die molekularen, strukturellen und funktionellen
Mechanismen. Methode: Durch molekularbiologischen Techniken wurde der vegfr-3
Promotor kloniert, um mittels 5’-Promotoranalyse unter Generierung von
Reportergenkonstrukten essentielle Promotorelemente und strukturelle
Charakteristika zu ermitteln. Transiente Transfektionen in Endothelzellen
zeigten ein Minimalpromotorelement, das als Sonde für EMSA-Studien zur
Identifikation nukleärer Transkriptionsfaktoren diente. Durch Synthetisierung
von Mutanten zum Einsatz als DNA-Sonde wurde die funktionelle Rolle der
identifizierten Transkriptionsfaktoren bestimmt sowie im heterologen
Promotorsystem ohne mammalischer Transkriptionsfaktoren untersucht.
Anschließend wurden die identifizierten strukturellen und funktionellen,
molekularen Charakteristika des vegfr-3 Promotors im Vergleich zu den
Vertretern der VEGF-/VEGFR-Familie interpretiert. Ergebnisse: Erstmals wurden
mit Sp1 und Sp3 aus der Familie der Zinkfinger-bindenen Proteine essentielle
Transkriptionsfaktoren für die Regulation des vegfr-3 Gens beschrieben, die an
(5')-101 TCCCGGGCCCGCCTCCGGCCCCCGCCCCGCCCCGCC -66(3') binden. Damit wurde für
vegfr-3 ein essentielles, regulatives GC-reiches Element im proximalen
Promotorbereich identifiziert. Für beide Transkriptionsfaktoren wurde eine
Transaktivatorfunktion mit Bindung an GC-Boxen gezeigt. Es konnte eine
bevorzugte Bindung von Sp1 an den vegfr-3 Promotor demonstriert werden. Für
vegfr-3 konnten konservierte GC-reiche Elemente mit ähnlichem Nukleotidmuster
im Vergleich zu anderen Vertretern der VEGF-/VEGFR-Familien nachgewiesen
werden. Diskussion: Mit der Analyse der transkriptionellen Regulation des
vegfr-3 Promotors wurde ein weiteres Gen aus der VEGF-/VEGFR-Familie
identifiziert, an dessen Regulation Sp1 und Sp3 beteiligt sind. Beide
Transkriptionsfaktoren wurden bereits für die Regulation
wachstumsterminierender Gen-Promotoren und Angiogenese-Gene beschrieben. Neben
VEGFR-3 wurden auch Sp1 und Sp3 in der Tumorgenese verschiedener
Tumorentitäten nachgewiesen. Sp1 wurde als unabhängiger, molekularer Marker
für das Magenkarzinom und das kolorektale Karzinom beschrieben, in denen auch
die erhöhte Expression von VEGFR-3 identifiziert wurde. Schlussfolgerung: In
dieser Arbeit konnten basale transkriptionelle Regulationsmechanismen der
Genexpression von vegfr-3 gezeigt werden. Die Ergebnisse sind bedeutungsvoll
für ein besseres Verständnis der molekularen Regulation von vegfr-3 und sollen
für weiterführende Untersuchungen die Grundlage für eine umfassendere
physiologische und pathobiologische Einordnung bieten.
de
dc.description.abstract
Enhanced expression of VEGFR-3 has recently been associated with clinical
outcome and lymphatic metastasis of solid malignancies including gastric
cancer. Despite the clinical importance and its generally accepted role in
lymphatic development and metastases, the molecular mechanisms controlling
vegfr-3 gene expression are largely unknown. After initial cloning of 2 kb of
the proximal human vegfr-3 promoter region, we identified a minimal regulatory
promoter element at -101/-66 as essential for vegfr-3 transcription.
Combination of EMSA studies, site-directed promoter mutagenesis and
overexpression experiments in SL-2 cells identified binding and activation of
the zinc finger proteins Sp1 and Sp3 as crucial mechanisms for vegfr-3
transcription. This study for the first time describes the molecular
mechanisms controlling human vegfr-3 gene transcription and identifies Sp-
factors as the core mediators of vegfr-3 transcription. By demonstrating the
molecular regulation of vegfr-3 transcription the study may contribute to a
development of new intervention strategies influencing lymphangiogenesis and
lymphatic metastases.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Transkriptionelle Regulation des lymphogenen VEGF - Rezeptor 3 - Gens in
Endothelzellen
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med. Michael Höcker
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. Chr. Röcken, Prof. Dr. med. M. Ebert
dc.date.accepted
2009-09-18
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000010336-1
dc.title.translated
Transcriptional regulation of lymphangiogenic VEGFR-3 in endothelial cells
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000010336
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000005685
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access