dc.contributor.author
Schröder, Arnold Günter
dc.date.accessioned
2018-06-07T19:01:01Z
dc.date.available
2011-06-15T08:10:49.449Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/5659
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-9858
dc.description.abstract
Das Ziel dieser Arbeit war es, die Entstehung paraxialen Mesoderms im
Mausembryo in einem in vitro System zu modellieren. Mit Hilfe des in vitro
Modells sollten transkriptionelle Veränderungen in den embryonalen Stammzellen
im Verlauf der Differenzierung ausgelesen und analysiert werden. Es wurde ein
Differenzierungsprotokoll in einer adhärenten Zellkultur etabliert, um aus
embryonalen Stammzellen der Maus mit hoher Effizienz paraxiales Mesoderm zu
generieren. Zur Beobachtung des Differenzierungsverlaufs und zur Analyse der
transkriptionellen Veränderungen in den Zellen während verschiedener Phasen
der Differenzierung wurde eine Reporterlinie mit zwei unterschiedlich
fluoreszierenden Markergenen generiert. Diese Stammzelllinie zeigte den
Eintritt der Zellen in den Primitivstreifen über einen T-Reporter sowie die
Bildung von Mesoderm über einen Msgn1-Reporter an. Die Reporterzellen wurden
zur Differenzierung in serumfreiem Medium gehalten und mit BMP4 und DKK1 oder
WNT3a und Noggin stimuliert. Mit Hilfe der Reportergene konnten die Zellen des
Primitivstreifens und des Mesoderms mit einem Durchflusszytometer während der
in vitro Differenzierung isoliert und ihre Transkriptionvergleichend
untersucht werden. Obwohl die fluoreszierenden Reporter in beiden Ansätzen
aktiviert wurden, konnte gezeigt werden, dass nur bei der Stimulation mit
WNT3a und Noggin Zellen mit transkriptionellen Eigenschaften des anterioren
Primitivstreifens und paraxialen Mesoderms entstehen. Unter den differenziell
exprimierten Genen konnten Faktoren identifiziert werden, die möglicherweise
eine bislang unbekannte Rolle bei der Entstehung von paraxialem Mesoderm
spielen.
de
dc.description.abstract
The aim of this study was to model the differentiation of paraxial mesoderm in
the mouse embryo using an in vitro system. A protocol was established that
allowed the generation of paraxial mesoderm from murine embryonic stem cells
with high efficiency. Using this in vitro differentiation technique,
transcriptional changes in murine embryonic stem cells were monitored and
analyzed in the course of their differentiation. To track the differentiation,
a dual reporter cell line was generated, harboring distinguishable fluorescent
reporter genes for T (Brachyury) and Msgn1 activity. These reporter genes
showed the transition to the primitive streak stage and adoption of mesoderm
fate, respectively. The differentiation of the reporter cells was induced in
serum-free medium containing two combinations of recombinant proteins, either
WNT3a and Noggin or BMP4 and DKK1. Using the two reporter genes, it was
possible to isolate cells of each stage of differentiation and do comparative
transcriptional analysis. It was found that both reporters were activated
under both conditions. Transcriptional analysis revealed that only after
stimulation with WNT3a and Noggin the cells showed expressional
characteristics of paraxial mesoderm and anterior streak derivatives. Genes
which were only upregulated in the Msgn1-reporter expressing population after
stimulation with WNT3a and Noggin were identified and represent genes with a
potential role in the development of paraxial mesoderm.
en
dc.format.extent
[8], 105 S.
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
embryonic stem cells
dc.subject
paraxial mesoderm
dc.subject
in vitro differentiation
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::570 Biowissenschaften; Biologie::570 Biowissenschaften; Biologie
dc.title
Differenzierung embryonaler Stammzellen der Maus zu paraxialem Mesoderm in
vitro
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Bernhard Herrmann
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Constance Scharff
dc.date.accepted
2011-06-06
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000023130-7
dc.title.translated
Differentiation of murine embryonic stem cells to paraxial mesoderm in vitro
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000023130
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000009572
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access