Ziel dieser in-vivo-Studie war es, den Einfluss einer CpG-ODN-Inhalation zusammen mit spezifisch ausgewählten Allergenen als lokale Hyposensibilisierung bei COB-erkrankten Pferden mit einer reinen CpG-ODN- Inhalation auf immunologischer Ebene explorativ zu vergleichen. Die Allergeninhalation sollte im Sinne einer lokalen Hyposensibilisierung (ASIT) durchgeführt werden. Der Einsatz zusammen mit den CpG-ODN als Adjuvants hat bei anderen Hyposensibilisierungstherapien bereits Erfolge erzielt, wurde jedoch bei COB- erkrankten Pferden noch nicht getestet. Es sollte untersucht werden, ob die kombinierte ASIT-CpG-ODN-Therapie einen deutlicheren immunologischen Effekt bewirken könnte als die alleinige CPG-ODN-Anwendung. Des Weiteren sollte gezeigt werden, ob die Therapie auch einen Langzeiteffekt nach Beendigung der Inhalation induzieren kann. Es gab bereits Studien, in denen die Wirkung und die Verträglichkeit der CpG-ODN A 2216 bei COB- erkrankten Pferden nachgewiesen wurde. Die Inhalation wurde im Unterschied zu vorrangegangenen Studien häufiger durchgeführt und die Patienten wurden sechs Wochen nach Therapieende erneut auf einen Langzeiteffekt hin untersucht. Es wurden insgesamt 20 mittelgradig an COB erkrankte Pferde in diese Studie aufgenommen. Bei allen Probanden wurde unmittelbar vor Studienbeginn ein Allergietest (FIT) durchgeführt. Die Pferde reagierten vor allem positiv auf Milben (Hausstaubmilbe, Heumilbe, Mehlmilbe) und Schimmelpilzantigene, aber auch der Raps zeigte häufig positive Reaktionen im FIT. Neun Pferde ließ man lediglich mit den CpG-ODN, gebunden an GNP als Trägersystem, inhalieren und 11 Pferden inhalierten zusätzlich (je nach FIT-Ergebnis) mit zwei spezifisch ausgewählten Allergenen. Die Inhalation wurde siebenmalig im Abstand von zwei Tagen durchgeführt. Vor der ersten Inhalation, zwei Tage nach der letzten Inhalation und nach weiteren sechs Wochen wurden Serum- und Trachealspülproben zur Bestimmung des Zytokinstatus entnommen. Mittels ELISA wurden in den Proben die Zytokine IL-4, IL-10, IFN-ү und IL-17 quantitativ bestimmt. Wobei das IL-17 lediglich in der Trachealspülprobe untersucht wurde. Man konnte bei keinem der gemessenen Zytokine einen signifikanten Effekt durch die zusätzliche Allergeninhalation nachweisen. IL-4 wurde insgesamt signifikant herunterreguliert. Eine Hochregulation des Th1-Zytokins IFN-ү und des regulatorischen IL-10 war nicht zu erkennen. Bei der Konzentrationsentwicklung des IL-17 war ebenfalls kein einheitlicher Abfall zu erkennen. Eine Korrelation mit dem prozentualen Anteil der neutrophilen Granulozyten im TBS lag nicht vor. Das entscheidende Ergebnis dieser Studie ist, dass eine immunologische Langzeitwirkung über mindestens sechs Wochen nach verhältnismäßig wenigen Inhalationen im Vergleich zu herkömmlichen inhalativen Therapieverfahren ohne weiterführende Therapie oder Haltungsveränderungen durch die Inhalation mit den CpG-ODN nachgewiesen werden konnte.
The aim of this in-vivo study was to exploratively compare the immunologic effect of a CpG-ODN-inhalation combined with specific selected allergens as a local hypo-sensitisation on COB-affected horses with a CpG-ODN-inhalation alone. The allergen inhalation should be executed in the sense of a local hypo-sensitisation (ASIT).The application together with the CpG-ODN as an adjuvants has already led to successes in other hypo-sensitisations. But until now it was not tested on COB-diseased horses. In this study it should be investigated whether the combined ASIT-CpG-ODN therapy caused a more marked immunologic effect than the only CpG-ODN-application. Furthermore it should be shown whether the therapy could induce a long term effect after ceasing the inhalation. There were already some studies in which the effect and the tolerance of the CpG-ODN- A 2216 were established on COB-affected horses. In contrast to foreign studies the patients were subjected to inhalation therapy more frequently and were examined again after six weeks to determine a long term effect. In total, 20 moderately COB-affected horses were included in this study. Immediately before the beginning of the study an allergy test (FIT) was carried out on all probands to determine to which allergens the horses reacted sensible. Most horses reacted positive to mites (dust mite, hay mite, flour mite) and mould antigens. Some patients reacted sensitive to pollen of grasses, trees and rape. With a random selection the patients were divided into two groups. Nine horses were only inhaled with the CpG-ODN bound to gelatin nanoparticles as transport medium and eleven horses were, in addition to that, inhaled with two specific selected allergens (dependent on the results of the FIT). The probands were inhaled seven times in an interval of two days. Before the first time of inhalation, two days after the last inhalation and after another six weeks, serum and tracheal wash samples were taken to determine the levels of the different cytokines. By means of ELISA the cytokines IL-4, IL-10, IFN-ү and IL-17 were quantified in the samples. Whereas the IL-17 was quantified only in the tracheal wash samples. For none of the measured cytokines a significant effect of the additionally inhaled allergens could be proven. Therefore the investigated parameters gave no indication that the local hyposensitisation on the immunological level had a better effect on the COB than the mono therapy with CpG-ODN. The IL-4 was significantly regulated down in total. An up-regulation of the Th-1-cytokine IFN-ү and the regulatory IL-10 could not be seen. Also on the development of the concentration of the IL-17 no uniform decrease could be seen. There was no correlation with the percentage part of the neutrophil granulocytes in the TBS. The key result of the study is, that an immunological long-term effect over at least six weeks with relatively few inhalations compared to conventional inhalative therapy methods (e.g. cortisone or bronchodilators) without further therapy or change in keeping conditions could be proven by inhalation with the CpG-ODN.
