YAP-protein is a transcription factor coactivator which is able to coactivate a broad spectrum of transcription factors that represent the downstream of different signaling pathways leading to quite different outcomes: oncogenesis, tumour suppression and apoptosis or differentiation. This study is an attempt to assess the expression of YAP protein and its biological role in cell lines representing different types of follicular cell-derived thyroid cancer and tissue specimens of normal, non-neoplastic and different neoplastic thyroid lesions using RT-PCR, Western blot and immunohistochemistry. RT-PCR demonstrated an increased expression of YAP mRNA in different types of thyroid can-cer cell lines in comparison to that in the normal thyroid tissues. Western blot confirmed YAP mRNA expression and showed that most of the YAP protein is phosphorylated at Ser-127 and strongly coexpressed with its candidates phosphorylating kinases AKT and/or LATS1. To dem-onstrate the real biological function of YAP-protein in these cell lines, YAP expression was knocked down in one thyroid cancer cell line (FTC-133) by RNAi technique using anti-YAP shRNA. The knocking down led to a dramatic reduction in apoptosis simultaneously with in-creasing resistance to cisplatin treatment but not to other four cytotoxic drugs (doxorubicin, mi-toxantron, vincristin and etoposide). Immunohistochemistry confirmed these findings, where it demonstrates that YAP protein is increased in its expression and accumulates predominantly cy-toplasmically as a phosphorylated form at Ser-127 residue with a prominent reduction in its ac-cumulation in the nuclei in different follicular cell- derived thyroid carcinomas in comparison to normal thyroid tissues. This study concluded that the high nuclear expression of YAP in normal thyrocytes will be changed to accumulate predominantly in the cytoplasm in malignant thyrocytes. Ser-127 phos-phorylation of YAP may play a significant role in this change. At the same time, YAP plays a significant role in selectively increasing chemosensitivity of thyroid cancer cell (FTC-133) to cisplatin but not to doxorubicin, mitoxantron, vincristin and etoposide.
Das Yes assozierte Protein (YAP) ist ein transkriptionfaktorkoaktivator für ein breites Spektrum von Transkriptionsfaktoren, welche in eine Vielzahl von Signalwegen involviert sind, die wie-derum an verschiedenen biologischen Prozessen wie Zelldifferenzierung, Tumorsuppression bzw. Onkogenese beteiligt sind. Ziel der vorliegenden Arbeit ist die Untersuchung der YAP-Expression in follikelzell- ausgehen-den Schilddrüsenkarzinomlinien und Schilddrüsengeweben verschiedener Schilddrüsenläsionen auf Protein- und Genebene, durch real-time PCR, Western Blot und Immunhistochemie. Ferner sollte der Einfluss von YAP auf die Proliferation, Apoptose und Chemoresistenz in malignen Schilddrüsenzellen ermittelt werden. Auf mRNA-Ebene konnte, im Vergleich zu normalen Schilddrüsengeweben, eine erhöhte YAP-Expression in den verschiedenen Schilddrüsenkarzinomzelllinien festgestellt werden. Diese Be-obachtung ließ sich auf Proteinebene, mittels Western Blot-Technik und Immunhistochemie, bestätigen. Dabei zeigte sich, dass follikelzell- ausgehende Schilddrüsenkarzinomen eine vor-nehmlich zytoplasmatische Akkumulation von YAP aufweisen. Überdies war der Großteil der YAP-Proteine am Serin 127 phosphoryliert. Und stark exprimiert mit den Zielprotienen AKT und/oder LATS1. Um die biologische Relevanz von YAP in vitro näher zu untersuchen, wurde dessen Expression in der Zelllinie FTC-133 durch den Einsatz von anti-YAP shRNA gehemmt. Die verminderte YAP-Expression hatte eine signifikante Reduktion der Apoptose, bei gleichzei-tig verstärkter Resistenz gegenüber Cisplatin, aber nicht gegenüber Doxirubicin, Mitoxantron, Vincristin und Etoposid, zur Folge. Die vorliegende Arbeit zeigt, dass maligne Thyrozyten, im Gegensatz zu normalen Thyrozyten, eine zytoplasmatische Überexpression von YAP aufweisen. Höchstwahrscheinlich ist die Phosphorylierung von YAP am Serin 127 dabei von Bedeutung. Gleichzeitig spielt YAP eine wichtige Rolle in der selektiven Erhöhung der Chemosensitivität gegenüber Cisplatin.
