dc.contributor.author
Matschulat, Tanja
dc.date.accessioned
2018-06-07T18:06:16Z
dc.date.available
2009-04-07T07:39:15.224Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/4622
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-8822
dc.description.abstract
Ziel dieser Studie war es herauszufinden, ob sich das Genexpressionsprofil von
Gliomzellen verändert, wenn diese mit Mikrogliazellen kokultiviert werden. Es
sollte untersucht werden, ob den Mikrogliazellen tumorfördernde oder
tumorantagonisierende Eigenschaften auf Gliomzellen zugewiesen werden können.
Rattengliomzellen und primäre Mikrogliazellen wurden einzeln und als Kokultur
im Transwell-Kokultur-Assay für 24 h kultiviert. Anschließend erfolgte nach
RNA-Isolierung die Ermittlung differentiell exprimierter Gene der einzelnen
Populationen (Mikroglia kokultiviert, nicht kokultiviert,
F98-Rattengliomzellen kokultiviert, nicht kokultiviert) mittels
neurobiologischer, rattenspezifischer Affymetrix®-Genchips. Die Hybridisierung
und Auswertung der Expressionsdaten erfolgte im Labor für funktionelle
Genomforschung der Charité (LFGC). Zur Bestätigung der Mikroarray-
Hybridisierungsdaten wurde die Real-Time quantitative PCR durchgeführt. Mit
Hilfe der cDNA-Mikroarray-Analyse konnten im Rahmen dieser Arbeit erstmals die
Expression von insgesamt 1323 Genen in Rattengliomzellen, die mit
Mikrogliazellen kokultiviert worden waren, untersucht werden. Nach der
Auswertung der Hybridisierungsdaten zeigte sich, dass nach Kokultur mit
Mikrogliazellen ein verändertes Genexpressionsprofil in Rattengliomzellen
vorliegt. Die Ergebnisse deuten darauf hin, dass Mikrogliazellen und
Gliomzellen sich gegenseitig beeinflussen, denn es konnten insgesamt 7 Gene
ermittelt werden, die nach Kokultur mit Mikrogliazellen differentiell
exprimiert in Rattengliomzellen vorlagen. Für 5 von 7 Genen zeigten sich
übereinstimmende Expressionsdaten sowohl in der Mikroarray- als auch in der
Real-Time-Quantifizierungsanalyse. Unter den 5 differentiell exprimierten
Genen hat sich herausgestellt, dass SOD3, HTR1A und ADRA1D das Tumorwachstum
unterstützen, während CREM und RIP-1 das Tumorwachstum hemmen.
Interessanterweise ergab sich der Hinweis, dass ADRA1D, HTR1A und CREM an der
Regulation der IL-6-Bildung in Gliomzellen beteiligt sein könnten. Mit Hilfe
eines rattenspezifischen IL-6-ELISA konnte im Zellkulturüberstand der
kokultivierten F98-Rattengliom-und Mikrogliazellen tatsächlich eine Erhöhung
der IL-6-Sekretion gemessen werden. IL-6 kann in Gliomzellen die GFAP-
Expression induzieren und spielt möglicherweise in der Differenzierung von
Gliomzellen eine Rolle. Mikrogliazellen scheinen demzufolge über eine
Modulation der Expression von ADRA1D, HTR1A und CREM einen wesentlichen
Beitrag zur IL-6-Sekretion und der daraus resultierenden Regulation der
Tumorprogression in Gliomen zu leisten.
de
dc.description.abstract
Aim of this study was to find out if the gene expression profile of glioma
cells changes after coculture with microglial cells. It also ought to be
analyzed whether microglia cells promote or avoid glioma growth and invasion.
Rat glioma cells and primary microglial cells were either grown alone or
cocultured for 24 hours using a transwell assay. After RNA isolation
differential gene expression analysis of each population was performed using
neurobiological rat-specific Affymetrix gene chips. Hybridization data
revealed a different gene expression profile in rat glioma cells after
coculture. The results indicate that microglial cells and glioma cells
influence each other because 7 differentially expressed genes were detected.
To confirm the results of the hybridization assay quantitative real time PCR
was performed. 5 of 7 genes showed concordant expression results in both
microarray and real time analysis. Among the 5 differentially expressed genes
SOD3, HTR1A and ADRA1D were indicated as promotors of tumor growth from the
literature while CREM and RIP1 are specified as inhibitors of tumor growth.
Interestingly, literature pointed towards IL-6 regulation through ADRA1D,
HTR1A and CREM. Using an IL-6-ELISA we detected elevated levels of IL-6 in the
cell culture supernatant of cocultured glioma cells. cells. IL-6 is able to
induce GFAP-expression in glioma and potentially plays a role in the
differentiation of glioma cells. Thus, our data indicate that microglia might
regulate IL-6 via expression of ADRA1D, HTR1A and CREM and set the stage for
further analysis of IL-6 contribution to glioma progression.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Differentielle Genexpressionsanalyse in Gliomzellen nach Interaktion mit
Mikroglia
dc.contributor.contact
tanja_matschulat@yahoo.de
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. A. von Deimling
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. A. Becker
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. rer. nat. R. Schäfer
dc.date.accepted
2009-06-14
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000009283-5
dc.title.translated
Differential gene expression analysis of glioma cells after interaction with
microglia
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000009283
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000005353
dcterms.accessRights.dnb
free
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open access