dc.contributor.author
Mauel, Susanne
dc.date.accessioned
2018-06-07T17:47:16Z
dc.date.available
2002-07-31T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/4269
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-8469
dc.description
Titelblatt, Inhaltsverzeichnis, Lebenslauf
1\. Einleitung
2\. Problemstellung
3\. Material+Methoden1
4\. Material+Methoden2
5\. Material+Methoden3
6\. Ergebnisse
7\. Diskussion
8\. Zusammenfassung
9\. Summary
Literaturverzeichnis</a
dc.description.abstract
In der vorliegenden Arbeit sollten dendritische Zellen (DC) aus der Haut von
Pferden isoliert und aus Monozyten differenziert und charakterisiert werden.
Zu diesem Zweck war es zunächst notwendig, die eq.Zytokine, Granulozyten-
Makrophagen Kolonie-stimulierender Faktor (GM-CSF), Interleukin 4 (IL-4) und
Interferon g (IFN g) herzustellen. Eq.GM-CSF wurde zunächst mit Hilfe von
Consensusprimern, die aus anderen Spezies abgeleitet wurden, amplifiziert und
hergestellt. Nach Durchführung des RACE-Verfahrens konnte eine Punktmutation
(Deletion) im Bereich des 3´Primers erkannt werden, die dazu führte, daß die
Proteinsequenz 8 Aminosäuren länger ist als bei anderen bekannten Spezies. Bei
eq.IL-4 stellte sich heraus, daß die veröffentlichten Sequenzinformationen
nicht korrekt waren, da sie Deletionen enthielten. Lediglich die
Sequenzinformationen zu eq.IFNg konnten bis auf eine Punktmutation bestätigt
werden. Um aktive rekombinante Proteine herzustellen, wurden pro- und
eukaryotische Expressionssysteme verwendet. Im bakteriellen System konnte für
alle Zytokine eine Überexpression gezeigt werden. Sie zeigten jedoch aufgrund
des gewählten Expressionssystemes keine biologische Aktivität. In mammalia
Zellen exprimierte Zytokine waren bioaktiv. Langerhans Zellen (LC) konnten aus
der Epidermis isoliert und morphologisch untersucht werden. Die Ausbeute war
jedoch sehr gering. Die beim Pferd isolierten peripheren Blutmonozyten (PBM)
wurden mit rekombinanten Zytokinen differenziert. Diese monozytären Zellen
wurden morphologisch und funktionell charakterisiert. Mit eq.IFNg stimulierte
Monozyten zeigten Charakteristika von Makrophagen (große adhärente Zellen mit
hochregulierter MHC II Expression). In licht- und elektronenmikroskopischen
Untersuchungen sowie Analysen der Oberflächenproteine im Durchflußzytometer
zeigten die mit eq.GM-CSF und eq.IL-4 stimulierten Monozyten Ähnlichkeit zu
den humanen MoDC (Schleierzellen mit Ausläufern mit hochregulierter MHC II und
CD86 Expression). Tests in der gemischten Leukozytenreaktion zeigten, daß die
MoDC Stimulationskapazität für T Zellen besaßen.
de
dc.description.abstract
In this thesis, dendritic cells (DC) should be isolated from the skin of
horses. Additionally monocytes should be differentiated to DC and
characterised. For this purpose, it was necessary to produce the equine (eq.)
cytokines, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF),
interleukin 4 (IL-4) and interferon g (IFNg). With the help of consensus
primers from other species, eq.GM-CSF was amplified and produced. After the
RACE-procedure, a point mutation (deletion) along a section of the 3´primer,
which resultated in a protein sequence 8 amino acids longer than other known
species, was identified. The published sequence information of eq.IL-4 was
revealed to be incorrect because it contained deletions. Only the sequence
information for eq.IFNg -except for one point mutation- could be confirmed. To
produce active recombinant proteins, both prokaryotic and eukaryotic
expression systems were used. In the bacterial system an over expression of
all cytokines was possible but, due to the system chosen, had no biological
activity. The expressed cytokines from mammalia cells were bioactive.
Langerhans cells (LC) isolated from the epidermis were examined
morphologically, however the cell yield was very low. The isolated peripheral
blood monocytes (PBM) from horses were differentiated with the recombinant
cytokines. These monocytic cells were characterised morphologically as well as
functionally. Eq. IFNg stimulated monocytes showed characteristics of
macrophages (large adherent cells with highly regulated MHC II expression).
Using light- and electron- microscopic thechniques as well as analysis of the
surface proteins by flow cytometry, there was found similarity between the eq
.GM-CSF and the eq.IL-4 stimulated monocytes with human MoDC (veiled cells
with pseudopodia and with highly regulated MHC II/CD86 expression). Tests of
the mixed leukocyte reaction showed that the MoDC possessed stimulation
capacity for T cells.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Horse, Cytokines
dc.subject
Interleukine 4
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::630 Landwirtschaft::630 Landwirtschaft und verwandte Bereiche
dc.title
Klonierung und Expression von eq.IFNg, eq.GM-CSF udn eq.IL-4 und deren Einfluß
auf die monozytären Zellen des Pferdes
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Hanns Ludwig
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Andreas Radbruch
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Erwin Reinwald
dc.date.accepted
2002-07-10
dc.date.embargoEnd
2002-07-31
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-2002001263
dc.title.translated
Cloning and expression of eq.IFNg, eq.GM-CSF and eq.IL-4 and their influence
on monocytic horse cells
en
refubium.affiliation
Veterinärmedizin
de
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FUDISS_thesis_000000000689
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http://www.diss.fu-berlin.de/2002/126/
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open access