dc.contributor.author
Niggemeyer, Marie Nicola
dc.date.accessioned
2018-06-07T16:54:59Z
dc.date.available
2008-02-20T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/3159
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-7359
dc.description
Deckblatt-Impressum
persönlicher Dank
Abkürzungen
Inhaltsverzeichnis
Einleitung
Literaturübersicht
Material und Methoden
Ergebnisse
Diskussion
Zusammenfassung
Summary
Literaturverzeichnis
Anhang
Danksagung
Selbständigkeitserklärung
dc.description.abstract
Die Expression von Genen, die Zellwachstum und -proliferation regulieren, ist
bei Krebserkrankungen verändert oder mutiert und führt zu unkontrollierter
Zellzyklus-Progression. Zu den potentesten Wachstumsregulatoren zählen sowohl
TGF-β1 als auch p21 und c-myc. TGF-β1 (Transforming Growth Factor beta 1)
reguliert in Assoziation mit seinem Bindungsprotein sLTBP-4 (»short form« des
Latent TGF-β Binding Protein 4), das als wichtigster Modulator der
TGF-β1-Bioverfügbarkeit gilt, verschiedenste Funktionen in epithelialen
Zellen, wobei seine antiproliferative und somit tumorsuppressive Wirkung eine
Hauptfunktion darstellt. Ein Mangel an TGF-β1 führt sowohl zu einer
reduzierten Expression des tumorsuppressiven CDKI (Cyclin-abhängigen
Kinaseinhibitoren) p21, als auch zu einer vermehrten Expression des
Protoonkogens c-myc. Beide Mechanismen bedingen sich gegenseitig, sind somit
prokanzerogen und induzieren eine verstärkte und ungehemmte Proliferation
epithelialer Zellen. In einem in vitro-Modell mit der epithelialen Zelllinie
HEK293T wurde in der vorliegenden Arbeit mittels quantitativer
Expressionsanalyse untersucht, inwiefern p21 und c-myc in Zellen mit einer
modulierten LTBP-4-Expression einer differentiellen Expression unterliegen.
Ziel war hierbei das nähere Verständnis der Korrelation des
TGF-β1-Bindungsproteins LTBP-4 mit dem CDKI p21 und dem Protoonkogen c-myc in
der Karzinogenese epithelialer Zellen. Im Rahmen der molekularbiologischen
Untersuchungen wurde zunächst das Genesilencing sowie die Überexpression des
sLTBP-4-Gens in HEK293T-Zellen etabliert. Die Ergebnisse der
proteinbiochemischen Untersuchungen ergänzten auf qualitativer Basis den
molekularbiologischen, quantitativen Nachweis einer erfolgreichen
sLTBP-4-Überexpression in HEK293T Zellen. In diesen Zellen wurde das
sL4-V5-Fusionsprotein regelmäßig detektiert, was eine erfolgreiche Translation
dokumentiert. In den folgenden qPCR-Analysen unterlagen die Gene TGF-β1, p21
und c-myc im vorliegenden in vitro - Modell des sLTBP-4-knock-down entgegen
den Erwartungen keiner Expressionsregulation. In sLTBP-4-überexprimierten
Zellen wurde eine vermehrte Genexpression von TGF-β1 und p21 sowie eine
verminderte c-myc-Expression wie erwartet festgestellt. Die Ergebnisse zeigen
somit eine Wechselbeziehung der untersuchten Zielgene im
sLTBP-4-Überexpressionsmodell und verdeutlichen deren Expressionskorrelation
in der Karzinogenese epithelialer Tumoren.
de
dc.description.abstract
The expression of genes regulating cell growth and proliferation, such as
TGF-β1, p21, and c-myc, can be altered or modified in the process of
carcinogenesis in epithelial tumors and therefore results in uncontrolled cell
cycle progression. TGF-β1 (transforming growth factor beta 1) in association
to its binding protein sLTBP-4 (»short form« of latent TGF-β binding protein
4) which is an important modulator of TGF-β1-bioavailability regulates
different functions in epithelial cells. Its antiproliferative and therefore
tumorsuppressive effects represent a major cellular function. A reduced
availability of TGF-β1 results in reduced expression of tumorsuppressive
CDKI`s (cyclin dependent kinase inhibitors), in particular p21, as well as in
augmented expression of protooncogenes, in particular c-myc. Both mechanisms
depend on each other, are procancerogenic and induce enhanced and unarrested
proliferation of epithelial cells. In the present project it was analyzed
using an in vitro model with the epithelial cell line HEK293T, wether p21 and
c-myc in cells with altered LTBP-4-expression undergo a differential
expression pattern themselves. The aim of this project was to get a closer
insight into the correlation of the TGF-β binding protein LTBP-4 with the CDKI
p21 and the protooncogene c-myc during the carcinogenic process of epithelial
cells. Gene silencing as well as transient overexpression of the sLTBP-4-gene
in HEK293T cells was established under in vitro conditions. The quantitative
molecular biological proof of sLTBP-4 overexpression in HEK293T cells through
qPCR inquisition was supported by western blot analysis. These
proteinbiochemical investigations completed the qPCR survey on a qualitative
basis. The sL4-V5 fusion protein was regularly detected, which documents a
successful translation. The following qPCR analysis showed contrary to the
expectations that there was no regulation of expression of the genes TGF-β1,
p21, and c-myc in the model of sLTBP-4-knock-down. Further on it was expected
to detect an enhanced gene expression of TGF-β1 and p21, as well as a reduced
expression of c-myc in sLTBP-4-overexpressed cells. In this case the analysis
showed an upregulation of TGF-β1- as well as p21-expression and a slightly
reduced expression of the c-myc-gene. The results of this study indicate a
correlation of the tested target genes in the model of sLTBP-4-overexpression
and clarify their interdependency in the process of carcinogenesis in
epithelial neoplasia.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
carcinogenesis
dc.subject
proto-oncogenes
dc.subject
gene expression
dc.subject
gene silencing
dc.subject
genes, tumor suppressor (MeSH)
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::630 Landwirtschaft::630 Landwirtschaft und verwandte Bereiche
dc.title
Einfluss experimentell modifizierter LTBP-4-Genexpression auf das
Expressionsprofil von TGF-β1, p21 und c-myc in HEK293T Zellen
dc.contributor.firstReferee
PD Dr. Anja Sterner-Kock
dc.contributor.furtherReferee
Univ.-Prof. Dr. Heidrun Fink
dc.contributor.furtherReferee
Univ.-Prof. Dr. Dr. Mohamed Hafez Ahmed Hafez
dc.date.accepted
2007-07-11
dc.date.embargoEnd
2008-02-25
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000003493-0
dc.title.translated
In vitro - investigations of the influence of altered gene expression of the
TGF-β-binding protein LTBP-4 on the expression pattern of the tumorsuppressive
CDKIs
en
refubium.affiliation
Veterinärmedizin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000003493
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2008/141/
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000003493
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access