dc.contributor.author
Ylera Dahmen, Francisco
dc.date.accessioned
2018-06-07T16:54:50Z
dc.date.available
1999-06-09T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/3155
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-7355
dc.description
Titel, Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung
> 1.1 Morbus Alzheimer
>
> 1.2 RNA
>
> 1.3 In vitro-Selektion
>
> 1.4 Stabilisierung von RNA
>
> 1.5 Vergleich von Aptameren und Antikörpern
2 Aufgabenstellung
3 Methoden
> 3.1 Chemische Nukleinsäuresynthese
> 3.2 Aufreinigung von Nukleinsäuren
> 3.3 Molekularbiologische Methoden
> 3.4 Vorbereitung der Affinitätschromatographie
> 3.5 Mikrobiologische Methoden
> 3.6 Charakterisierung der Aptamere
4 Ergebnisse
> 4.1 Immobilisierung der Peptide
>
> 4.2 In vitro-Selektion
>
> 4.3 Charakterisierung der Aptamere
5 Diskussion
6 Zusammenfassung
7 Summary
8 Literaturverzeichnis
Anhang
> A Geräte, Enzyme und Chemikalien
>
> B Puffer und Medien
>
> C Lebenslauf
>
> D Eigene Publikationen
dc.description.abstract
Die Ursache der Alzheimer-Krankheit ist immer noch unbekannt, jedoch ist sie
nach dem derzeitigen Kenntnisstand eng verknüpft mit der Ablagerung des
Amyloid-Peptids im Gehirn der Patienten. Daher spielt das Amyloid bei der
Suche nach Medikamenten und Diagnostika eine entscheidende Rolle. Durch
Einsatz der RNA-Technologien sollte mit dieser Arbeit ein Hilfsmittel für die
weitere Untersuchung der Alzheimer-Krankheit zur Verfügung gestellt werden.
Die in vitro-Selektion erlaubt das Design von spezifischen Nukleinsäuren gegen
fast jedes Zielmolekül. Damit ist zu den Antikörpern eine neue Stoffklasse
getreten, mit der man einige Probleme der Antikörper umgehen kann. Vor allem
die chemische Synthese der Nukleinsäuren erlaubt eine maßgeschneiderte
Modifizierung wie z. B. den Einbau von Reportermolekülen, wodurch sie sich
hervorragend eignen für analytische und diagnostische Aufgaben. Da eine
Veränderung des Amyloid-Gehalts im Blut von Alzheimer-Patienten beschrieben
wurde, wäre ein Einsatz von Aptameren für eine Diagnose denkbar. Weiterhin
wurden bereits Antikörper vorgestellt, die eine Aggregation des Amyloids zu
den senilen Plaques verhindern kann. Auch hier wäre ein Einsatz von Aptameren
vorstellbar.
Mit Hilfe der Methode der in vitro-Selektion wurde aus einer kombinatorischen
RNA-Bibliothek mit ca. 1015 unterschiedlichen Molekülen hochaffine RNA-
Aptamere gegen das Amyloid b A4(1-40) und ein Fragment b A4(1-16) isoliert.
Dazu wurde eine DNA-Bibliothek mit 70 randomisierten Nukleotiden chemisch
synthetisiert und für die Selektion in RNA transkribiert. Nach 8
Selektionszyklen, bestehend aus Selektion und Amplifikation, konnten affine
Moleküle isoliert werden. Die apparenten Dissoziationskonstanten dieser
Aptamere liegen bei 29-48 nM für das lange Peptid bzw. 758 nM für das kurze b
A4(1-16) Fragment. Die für das Amyloid erhaltenen Aptamere liegen in dem
Bereich der besten für Peptide bisher isolierten Aptamere, während für
kleinere, flexiblere Peptide häufig Aptamere im mikromolaren Bereich
beschrieben wurden.
In dieser Arbeit wurden Wege zu neuen Hilfsmitteln für die Untersuchung und
Diagnose der Alzheimer-Krankheit vorgestellt. Nun sollten diese Aptamere auf
ihre Wirksamkeit überprüft werden, um dann eine Verkürzung der Sequenzen und
eine Modifizierung der RNA zur Stabilisierung gegenüber RNasen anzuschließen.
de
dc.description.abstract
Although the cause of the Alzheimer´s disease is still unknown, it is supposed
to be closely related with the deposition of amyloid peptides in the brain of
patients. The amyloid is thus a major target in the search for novel
diagnostics and therapeutic approaches. This work employs RNA-technologies to
develop new tools for the study of the Alzheimer´s disease. The in vitro
selection enables the design of specific nucleic acids (aptamers) against
almost any target molecule. The aptamers have similar properties as monoclonal
antibodies, but several advantages. The chemical synthesis of these nucleic
acids enables tailor-made modifications. By introduction of specific reporter
groups these RNAs become suitable tools for analytical and diagnostic
purposes. Since a change of the amyloid concentration has been reported in the
blood of Alzheimer´s disease patients, the use of amyloid-specific aptamers
for diagnosing the disease seems conceivable. Moreover, antibodies have been
reported that prevent the aggregation of amyloid into senile plaques. This
points towards a potential therapeutic application of the amyloid-specific
aptamers.
High affinity RNA aptamers against the b A4(1-40) and a fragment b A4(1-16)
were isolated from a combinatorial library of 1015 different molecules by
using in vitro selection. For this purpose a DNA library containing 70
randomised nucleotides was chemically synthesised and transcribed into RNA.
Affinic molecules were isolated after 8 rounds of selection and amplification.
The apparent dissociation constants of these aptamers were 29-48 nM for the
long peptide and 758 nM for the short b A4(1-16) fragment. The binding
constants for the aptamers against the amyloid are within the range of the
highest affinities so far described for peptide-specific aptamers.
This work introduces a new approach for the study and diagnosis of the
Alzheimer´s disease. In future experiments, the efficacy of the aptamers needs
to be tested. In addition, identifying the minimal binding motifs and
enhancing the stability of the aptamers against RNase degradation are
necessary steps to render these aptamers into reliable tools.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
in vitro selection
dc.subject
alzheimer´s disease
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::540 Chemie::540 Chemie und zugeordnete Wissenschaften
dc.title
Selektion hochaffiner RNA-Moleküle gegen das Alzheimer beta-Amyloid
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. Volker A. Erdmann
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. Brigitte Wittmann-Liebold
dc.date.accepted
1999-04-29
dc.date.embargoEnd
2000-08-24
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-1999000337
dc.title.translated
Selection of high-affinity RNAs for the Alzheimer´s beta-amyloid
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000000115
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/1999/33/
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000000115
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access