dc.contributor.author
Hüttner, Johann
dc.date.accessioned
2018-06-08T01:08:49Z
dc.date.available
2016-11-16T11:25:24.741Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/12993
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-17191
dc.description.abstract
Das Humangenomprojekt lieferte der Menschheit vor etwas mehr als zehn Jahren
die Entschlüsselung ihres eigenen Erbguts. Um aus dem neugewonnenen Wissen
Rückschlüsse ziehen zu können, bedarf es neben einer kontinuierlichen
Erforschung der entdeckten Gene auch eines Verständnisses der Flut an
Wechselwirkungen, die diesen Mikrokosmos regulieren. Einsicht in die
Wechselwirkungen bereitet den Boden für eine Fülle an Anwendungen in der
Humanmedizin und darüber hinaus. In vorliegender Arbeit wurde das Gen PITX1
untersucht, welches für die korrekte Entwicklung der hinteren Extremität
verantwortlich ist. Wird es in dieser Funktion gestört und z.B. in der
vorderen Extremität unerwartet hochreguliert, entwickelt sich eine als
homeotische Tranformation bekannte Störung, die als Liebenberg-Syndrom bekannt
ist1. Die entstehende vordere Extremität ähnelt dabei dem Aussehen nach einem
Arm, entwickelt aber morphologische Charakteristika der hinteren Extremität2.
In dieser Arbeit wurden neun potentiell regulatorische Abschnitte (Enhancer)
aus dem Genom um PITX1 ausgewählt. Sie wurden mithilfe eines LacZ-
Reporterkonstrukts auf ihre Funktion in vivo hin untersucht. Dazu wurden sie
über verschiedene Klonierungsschritte und Transfektion in embryonale
Stammzellen eingebracht, die in Mäuse verpflanzt wurden. Die resultierenden
Embryonen wurden vor Austragung entnommen und an Tag E11.5 mit einer Lösung
behandelt, die bei erfolgreicher Klonierung und gleichzeitiger regulatorischer
Aktivität der Abschnitte eine blaue Färbung hervorrief. Aus den Versuchen
resultierten verschiedene, teils überlappende Expressionsmuster, die auf eine
vielgestaltige regulatorische Aktivität der untersuchten Kandidaten hinweisen.
Die Expression trat auch an Stellen auf, die nicht mit PITX1 in Verbindung
gebracht werden. Trotz einer erfolgreich verlaufenen Klonierung ließ sich kein
eindeutiger PITX1-Enhancer identifizieren. Zu vermuten bleibt, dass entweder
ein einzelner Enhancer verantwortlich ist, aber durch Art des Versuchsaufbaus
unentdeckt blieb, oder dass das Zusammenwirken mehrerer Enhancer in vivo für
die korrekte PITX1-Expression verantwortlich ist. Wie die Vielfalt an
Expressionsmustern zu der räumlich und zeitlich sehr umschriebenen
PITX1-Expression führen könnte, muss eingehender untersucht werden.
de
dc.description.abstract
The human genome was sequenced more than ten years ago, still the diversity of
gene regulation remains to be elucidated. A plethora of regulatory elements
has been found to direct the human genome, the rules that govern this
territory are slowly being revealed. In this paper, we aim to better
understand the regulatory landscape surrounding the homeotic gene PITX1, which
has been shown to drive development of the hind limb, and, when ectopically
expressed, the forelimb in what has come to be known as the Liebenberg-
Syndrome1,2. We selected eight regulatory elements we believed to be enhancers
of PITX1 after reviewing conservation tracks, histone modifications and 4C
Data from our lab. These were then cloned along with a reporter construct,
transfected into embryonic stem cells and transplanted into a mouse. The
resulting embryos were harvested on day E11.5 and treated with a staining
solution which is metabolized by the reporter gene only when the particular
enhancer is active, thus indicating its area of influence. All the Enhancers
involved show some sign of staining, though none of the shown expression
patterns completely overlaps with the PITX1-pattern anticipated. This
discrepancy may be owed in part to the setup, as the single main enhancer of
PITX1, should it exist, may have been shrouded. Also, several enhancers acting
simultaneously may in fact drive the expression of PITX1, a concept that
cannot be investigated with this method. Thus, further research is necessary
to fully comprehend genomic interaction at this locus.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
cis-regulatory
dc.subject
cis regulatory
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Die cis-regulatorische Landschaft von PITX1
dc.contributor.firstReferee
N.N.
dc.contributor.furtherReferee
N.N.
dc.date.accepted
2016-12-09
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000103323-2
dc.title.translated
The cis-regulatory landscape of PITX1
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000103323
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000020292
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access