dc.contributor.author
Leucht, Stephan
dc.date.accessioned
2018-06-08T01:06:03Z
dc.date.available
2009-01-15T08:39:31.545Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/12915
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-17113
dc.description.abstract
In dieser Arbeit wurde das erste Mal eine Phage Display Bibliothek als
Spiegelbild des Antikörperrepertoires einer Patientin mit Kawasaki-Syndrom
nach Diagnosestellung aber vor Behandlung mit IVIG sowie 2 Monate nach
Behandlung mit IVIG erstellt. Durch biopanning mit IVIG wurden diejenigen Fab-
Phagen isoliert, welche intensiv von IVIG gebunden wurden. Bei den IVIG-
selektierten Fab-Phagen der Phage Display Bibliothek vor Behandlung mit IVIG
fiel auf, dass 5 der 11 sequenzierten Klone bei der schweren Kette das
Keimbahngensegment DP54/V3-7 des Keimbahnlokus V3-07 nutzten. In den zufällig
ausgewählten Klonen vor biopanning kam dieses Keimbahnsegment jedoch überhaupt
nicht vor. In den CD-Regionen der schweren Kette dieser Klone kam es zu
maximal einer Austauschmutation, was die Vermutung nahelegt, dass diese Klone
nicht eine Antigenselektion durchlaufen haben, sondern vielleicht die
Stimulation eines Superantigens außerhalb der antigenbindenden Region zur
Vermehrung dieser Klone geführt hat. Im Vergleich der gewonnenen Sequenzen
dieser Klone mit bereits bekannten Sequenzen aus Genbanken fand sich leider
auch keine Homologie zu bekannten antiepithelialen Antikörpern. Aufgabe
fortführender Arbeiten könnte hier die Etablierung eines ELISAs mit
endothelialen Zellen sein, um die vielleicht vorhandene Interaktion dieser
Klone mit Endothelzellen zu untersuchen und sie somit ursächlich mit der
endothelialen Schädigung der Koronargefäße in Verbindung zu bringen. Die
schweren Ketten von 5 der verbleibenden 6 IVIG-selektierten Klone der Phage
Display Bibliothek vor Behandlung mit IVIG enstammten den Keimbahngenloki
V3-23 und V3-30. Die schweren Ketten der 10 IVIG-selektierten Fab-Phagen der
Phage Display Bibliothek 2 Monate nach Behandlung mit IVIG enstammten alle bis
auf 3 den Keimbahngenloki V3-23 und V3-30. Bereits in den anderen Arbeiten
unserer Arbeitsgruppe konnte eine Häufung dieser beiden Loki unter den IVIG-
selektierten Fab-Phagen beobachtet werden. Obwohl diese beiden Keimbahngenloki
im fetalen als auch im reifen Antikörperrepertoire am häufigsten genutzt
werden, fand sich in den zufällig ausgewählten Klonen vor biopanning in dieser
wie auch den vorangegangenen Arbeiten keine Präferenz von bestimmten
Keimbahngenloki. Somit stärkt auch diese Arbeit die Hypothese, dass IVIG
vornehmlich mit den variablen Regionen der schweren Ketten, welche den
Keimbahngenloki 3-23 und 3-30 entstammen, interagiert. Antikörper dieser
beiden Keimbahngenloki spielen in der Regulation des natürlichen
Antikörperrepertoires eine besondere Rolle. Eine V-Region vermittelte
Interaktion von IVIG mit membranständigen IgG-Rezeptoren, die in ihren
schweren Ketten diese beiden Keimbangenloki nutzen, könnte zu einer
Stimulation einer großen Anzahl von B-Zellen führen und somit die natürliche
Hömostase des Antikörperrepertoires wieder herstellen und folglich die Bildung
von Autoantikörpern unterdrücken. Dies wäre eine mögliche Erklärung für die
immunmodulatorische Langzeitwirkung von IVIG auch in der Therapie des
Kawasaki-Syndroms.
de
dc.description.abstract
For the first time it was built up a Phage Display Libary for Antibodies of a
patient diagnosed with Kawasaki Syndrom prior to the treatment with
Intravenous Immunoglobulin (IVIG) and two month after to investigate the built
up Antibody-Repertoire. With biopanning with IVIG I isolated those antibodies,
which were bound intensivly to IVIG. Within the IVIG-selected Fab-Phages of
the Phage Display Library prior to the treatment with IVIG 5 of 11 sequenzed
Clones belong to the germlinesegment DP54/V3-7 of the germlinelocus V3-07 in
there heavy chains. In the CD-Region of these heavy chains there was only one
mutation. Supposingly these heavy chains were not selected by a specific
stimulation of a single antigen, but by a non-specific stimulation of a
superantigen, which binds besides the antigenbinding groove of a T-cell-
Receptor. Unfortunately non of the Sequences have been similar to known
antiendothelial antibodies, which was proofed in Gen-Databases. 5 of the
resting 6 IVIG-selected Clones were using the Germline-Loki V3-23 and V3-30.
Out of the Phage Display Library after treatment with IVIG I selected 10
clones by biopanning with IVIG. All but 3 were using also the Germline-Loki
V3-23 and V3-30. Antibodies of these Germline-Loki are used in the regulation
of the natural antibodierepertoire. So it might be possible, that IVIG
stimulates via his V-Region IgG-Rezeptors of B-cells, which uses these
Germline-Loki, to stimulate a large amount of B-cells. These B-cells are then
responsible for a backregulation to the natural hömostase of the
antibodierepertoire and surpresses the development of autoantibodies. These
interaction might be responsible for the longterm immunmodularic results after
the treatment with IVIG in Kawasaki-Syndrom.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Klonierung und molekulare Charakterisierung humaner, monoklonaler Antikörper
einer Patientin mit Kawasaki-Syndrom vor und nach Behandlung mit IVIG mittels
kombinatorischer Phagen-Display-Bibliothek
dc.contributor.contact
stephan.leucht@charite.de
dc.contributor.firstReferee
Prof. Dr. med. G. Gaedicke
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. A. Salama
dc.date.accepted
2009-01-30
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000007136-2
dc.title.translated
Clonisation and moleculare characterisation of human. monoclonal antibodies of
a patient with Kawasaki-Syndrom prior and after treatment with IVIG by
combinatoric Phage-Display-Libary
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000007136
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000011334
dcterms.accessRights.dnb
free
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open access