dc.contributor.author
Steinz, Kirsten
dc.date.accessioned
2018-06-08T00:35:56Z
dc.date.available
2012-07-02T08:55:14.247Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/12181
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-16379
dc.description.abstract
Die LCT stellt eine vielversprechende alternative Therapie zur OLT für
bestimmte Formen des Leberversagen dar. Der bisher gängige intraportale
Applikationsweg kann jedoch nicht immer klinisch angewendet werden. Und
erscheint hinsichtlich einer gefahrlosen und effizienten Implantation der
Spenderhepatozyten im Empfängerparenchym nicht optimal. Aus diesem Grunde sind
alternative Applikationsrouten und ektoper Implantationsorte zu evaluieren. Im
Kleintiermodell wurde die ektope Hepatozytentransplantation in die Milz
erfolgreich durchgeführt, während es im Großtiermodell widersprüchliche
Ergebnisse gibt. In der vorliegenden Arbeit wurden die Applikationsrouten via
Portalvene, via A. gastroepiploica und per direkter Milzinjektion von
allogenen Donorhepatozyten im Großtiermodell evaluiert. Dabei wurde die
Zellintegration ins Leberparenchym im präklinischen Großtiermodell des
Miniaturschweines untersucht. Männliche Spenderhepatozyten von
Landrasseschweinen wurden mit MPIO-Partikeln in vitro in Adhäsionskultur
markiert, danach erfolgte die LCT über die drei Applikationsrouten. Die
Empfängertiere wurden wiederholt zur in vivo Zelldetektion im 3.0 Tesla MRT
und computertomographisch für einem Zeitraum von bis zu acht Wochen nach LCT
untersucht. Im MRT und korrelierenden histologischen Untersuchungen zeigten
sich Mikroembolisationen der Donorhepatozyten. Eine Zelldetektion in vivo im
MRT war möglich. Die Zellapplikation per direkter Milzinjektion, verglichen
mit intraarterieller Zellapplikation via A. gastroepiploica, führte zu einer
Zellretention in der Milz und einer geringeren Translokation in das
Leberparenchym der Empfängertiere. Nach intraportaler Zellapplikation kam es
vermehrt zur Bildung von Mikrothromben im Portalstromgebiet, die bis zu acht
Wochen nach LCT persistierten. Die Zelladministration via A. gastroepiploica
führte zu signifikant weniger Thrombenbildung. Die Zellintegration der
Donorhepatozyten ins Leberparenchym wurde mittels Berliner-Blau-Färbung, FISH-
Typing und PCR untersucht. Dabei wurde eine vergleichbare Quantität an
transplantierten Hepatozyten in die Leber bei intraportaler und
intraarterieller Zelladministration nachgewiesen. Die Zellmenge nach
Milzinjektion war signifikant geringer. Nach Milzinjektion kam es zur Bildung
von Hepatozytennestern im Milzparenchym. Dies konnte mittels
immunhistologischer Färbung mit hepatozytenspezifischen Antikörpern
nachgewiesen werden. Nach Applikation der Zellen via A. gastroepiploica
konnten nur einzelne wenige Zellen in der Milzpulpa dargestellt werden. Die
Entzündungsreaktion und Nekrose im Empfängerparenchym unterschied sich nicht
signifikant bei den drei Applikationsrouten. Diese Ergebnisse zeigen relevante
Mechanismen in der klinischen Anwendung der LCT auf und suggerieren, dass die
Applikationsroute via. A. gastroepiploica weiter evaluiert werden sollte.
Diese Ergebnisse stellen einen vielversprechenden Ansatz in der ektopen
Transplantation von Hepatozyten dar. Des Weiteren konnte gezeigt werden, dass
die in vivo Zelldetektion eine frühzeitige Erkennung von möglichen
Komplikationen durch transplantierte Hepatozyten ermöglicht.
de
dc.description.abstract
LCT is a promising therapeutical alternative approach to OLT for certain kinds
of liver failure. The most common way of application is by injection into the
portal vein. Unfortunately this technique cannot be applied in all clinical
situations. It doesn`t appear to be optimal with respect to a riskless and
efficient implantation of donor hepatocytes in the recipient parenchyma. Thus,
alternative application routes and ectopic implantation sites are to be
evaluated. In the small animal model ectopic hepatocyte transplantation in the
spleen was successfully conducted, meanwhile there are contradictory results
in the large animal model. In this study the application via intraportal
route, A. gastroepiploica and direct injection in the splenic parenchyma with
allogenic donor hepatocytes in the large animal model were examined. The cell
integration into the liver parenchyma in the preclinical large animal model of
the MiniPig was assessed. Male donor hepatocytes from landrace pigs were
marked with MPIO particles in in vitro adhesion culture, afterwards LCT was
conducted via those three application routes. The recipient animals were
repeatedly put through an 3.0 Tesla MR- and CT scan for in vivo cell detection
for a time span of up to eight weeks after LCT. Microembolisations of donor
hepatocytes were found in the MRI scan and were correlated with the
histological examination. A cell detection in vivo in the MRI was possible.
Application of cells by direct parenchymal injection into the spleen, compared
to intraarterial application via A. gastroepiploica led to retention of cells
in the spleen with less translocation of cells to the liver parenchyma of the
recipient animals. Intraportal cell application led to increased formation of
microembolisations in the portal area, which persisted for up to eight weeks
post transplantation. The transplantation via A. gastroepiploica led to
significantly less formation of thrombi. Cell integration of donor hepatocytes
into the liver parenchyma was assessed via Prussian blue staining, FISH-Typing
and PCR. Hence a similar quantity of transplanted hepatocytes in the liver
were found after intraportal or intraarterial cell administration. The cell
quantity after direct splenic injection was significantly lower. Direct
injection into the spleen led to the formation of nests of hepatocytes in the
splenic parenchyma, which was verified by immunohistological staining with
hepatocyte specific antibodies. Application of cells via A. gastroepiploica
resulted in only few single cells in the splenic pulp. Inflammation and
necrosis in the recipient parenchyma didn`t differ significantly in any of the
three application routes. Those results demonstrate relevant mechanisms in the
clinical application of the LCT and suggest that administration via A.
gastroepiploica should be further evaluated. Those results present a promising
approach in the ectopic transplantation of hepatocytes. Furthermore we showed
that in vivo cell detection enables a early recognition of possible
complications by transplanted hepatocytes.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
Cell transplantation
dc.subject
Splenic injection
dc.subject
liver cell transplantation
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Evaluation der Applikationsrouten für die Leberzelltransplantation im
Großtiermodell
dc.contributor.firstReferee
Priv.-Doz. Dr. med. I. M. Sauer
dc.contributor.furtherReferee
Prof. Dr. med. S. Jonas
dc.contributor.furtherReferee
Priv.-Doz. Dr. med. U. Teichgräber
dc.date.accepted
2012-06-03
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000036730-6
dc.title.translated
Evaluation of application routes for liver cell transplantation in the large
animal model
en
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000036730
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000010907
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access