dc.contributor.author
Klaile, Esther
dc.date.accessioned
2018-06-07T23:47:12Z
dc.date.available
2006-02-21T00:00:00.649Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/10982
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-15180
dc.description
Titelblatt und Inhalt
Einleitung
Zielsetzung
Ergebnisse (Teil 1)
Ergebnisse (Teil 2)
Ergebnisse (Teil 3)
Ergebnisse (Teil 4)
Diskussion
Zusammenfassung / Summary
Materialien und Methoden
Literatur
Anhang
dc.description.abstract
In dieser Arbeit wurde Filamin A als neuer intrazellulärer Interaktionspartner
von CEACAM1-L identifiziert. Um die funktionelle Auswirkung der Interaktion
von CEACAM1-L und Filamin A zu untersuchen, wurde ein humanes Melanom-
Zellsystem etabliert, dass die Filamin A- und CEACAM1-L-negativen wt-M2-Zellen
und die daraus durch Transfektion entstandenen Filamin A-exprimierenden
A7-Zellen zur Grundlage hatte. Beide Zelllinien wurden mit CEACAM1-L
transfiziert, so dass die Zelllinien M2-CC1 und A7-CC1 entstanden. Filamin A
und CEACAM1-L lagen also jeweils einzeln exprimiert und koexprimiert vor. Es
konnte in Transwell-Migrations- und -Invasions-Assays sowie in Monolayer-
Wundheilungs-Assays gezeigt werden, dass die alleinige Expression von
CEACAM1-L die Zellstreuung und die Migration erhöhte, aber keinen Einfluss auf
die Invasion hatte. Die alleinige Expression von Filamin A hatte keinen
Einfluss auf die Zellstreuung, erhöhte aber die Migration und die Invasion.
CEACAM1 und Filamin A schienen verschiedene Mechanismen für ihre pro-
migratorische Funktion zu nutzen, da sie unterschiedliche Auswirkungen auf die
Organisation des Aktinzytoskeletts und die Phosphorylierung von Integrin-
abhängigen Adhäsionen hatten. Die Koexpression der beiden Proteine bewirkte
die völlige Inhibition der Zellstreuung sowie eine starke Reduktion der
Migration und der Invasion. Es konnte gezeigt werden, dass die Bindung von
CEACAM1-L und Filamin reguliert ist und dass die Bindung von CEACAM1-L und
Filamin A dessen Interaktion mit der kleinen GTPase RalA stört. Der zweite
identifizierte Interaktionspartner von CEACAM1-L ist das Poldip2. Es wurde ein
Poldip2-spezifischer Antikörper hergestellt und Koimmunpräzipitationen
zeigten, dass CEACAM1-L und Poldip2 auch in vivo interagieren. Es konnte eine
zytoplasmatische und nukleäre Lokalisation von Poldip2 in endothelialen und
epithelialen Zellen gezeigt werden. In indirekten Immunfluoreszenzen wurde
gezeigt, dass die intrazelluläre Lokalisation von Poldip2 in NBT-II-Zellen
durch die Zelldichte und durch die Behandlung mit EGF beeinflussbar war. Für
strukturelle und funktionelle Untersuchungen von Mitgliedern der CEA-Familie
wurden eine Reihe verschiedener CEACAM-Fc-Konstrukte kloniert und exprimiert.
Dazu wurden die extrazellulären Domänen der humanen CEACAMs 1, 5, 6 und 8
sowie des Ratten-CEACAM1 mit der konstanten Region der schweren Kette eines
humanen IgG fusioniert.
de
dc.description.abstract
Here, filamin A was identified as a novel cytoplasmic CEACAM1-L interacting
protein. For functional studies on the CEACAM1-L-filamin A interaction, a
human melanoma cell system was established. The CEACAM1-L- und filamin
A-negative M2 cells und the derived, filamin A-rescued A7 cells were both
transfected with CEACAM1-L cDNA. The resulting cell lines were named M2-CC1
und A7-CC1. Thus, the cell system included CEACAM1-L- und filamin A-single
transfectants und one cotransfectant. In monolayer wound-healing assays and in
transwell migration and invasion assays CEACAM1-L was shown to enhance cell
scattering und migration when expressed solely, while it had no effect on
invasion. Filamin A enhanced migration und invasion when expressed solely but
had no effect on cell scattering. CEACAM1-L und filamin A seemed to use
different pathways to exert their promigratory functions, since they diversely
influenced the organization of the actin cytoskeleton and the phosphorylation
of integrin-based adhesions. In contrast, CEACAM1-L-filamin A-double-
transfectants exhibited virtually no cell scattering und showed a decreased
motility und a reduced filamin A induced invasivity. Additionally, binding of
CEACAM1-L to filamin A was dynamic and interfered with the filamin A-RalA
interaction. The second interaction partner of CEACAM1-L identified here, was
poldip2. A poldip2-specific polyclonal antibody was produced and the
interaction of CEACAM1-L and poldip2 was confirmed by coimmunoprecipitation.
Cellular fractionation revealed a cytoplasmic und nuclear localisation of
poldip2 in endothelial and epithelial cells. The intracellular localization of
poldip2 in NBT-II cells was affected by confluency und by the treatment with
EGF, as shown by indirect immunofluorescence. Several CEACAM-Fc fusion
constructs were cloned and expressed to be used in functional and structural
studies on members of the CEA-family. The extracellular domains of rat CEACAM1
and human CEACAMs 1, 5, 6 and 8 were fused to the constant region of a human
IgG heavy chain.
en
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
CEACAM1 CD66a Filamin ABP280
dc.subject.ddc
500 Naturwissenschaften und Mathematik::540 Chemie::540 Chemie und zugeordnete Wissenschaften
dc.title
Identifizierung und Charakterisierung neuer intrazellulärer Bindungspartner
von CEACAM1-L und deren Einfluss auf CEACAM1-L-vermittelte zelluläre
Funktionen
dc.contributor.firstReferee
Professor Dr. Werner Reutter
dc.contributor.furtherReferee
Professor Dr. Gerd Multhaup
dc.date.accepted
2006-02-08
dc.date.embargoEnd
2006-02-27
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-2006001050
dc.title.translated
Identification and characterization of novel CEACAM1-L-interacting proteins
and their influence on CEACAM1-L-mediated cellular functions
en
refubium.affiliation
Biologie, Chemie, Pharmazie
de
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FUDISS_thesis_000000002020
refubium.mycore.transfer
http://www.diss.fu-berlin.de/2006/105/
refubium.mycore.derivateId
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open access