dc.contributor.author
Ly, Nam Matthias
dc.date.accessioned
2018-06-07T23:32:52Z
dc.date.available
2018-03-03T09:39:04.194Z
dc.identifier.uri
https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/10615
dc.identifier.uri
http://dx.doi.org/10.17169/refubium-14813
dc.description.abstract
Introduction: Autoimmune diseases like SLE are associated with pathogenic
antibodies and malignant neoplasms such as multiple myeloma with abnormal PCs.
In both cases, pathogenesis can be related to LLPCs, which require a specific
microenvironment composed of stromal cells, haematopoietic stem cells and
cytokines. MKs constitute an important niche component as major sources of
APRIL and IL-6. TPO is the crucial growth factor for MKs and c-mpl, its
receptor. Thus, alterations in megakaryopoiesis can change survival conditions
for LLPCs in the niche. Our group found an SNP in the crucial TPO binding
domain of c-mpl in SLE-prone mice, and the first part of this thesis aimed to
find evidence for a similar mutation in SLE patients. The second part
evaluated the effect of selected HNCs in co-culture with murine MM cells.
Methods: Genomic DNA from 40 SLE patients and 15 healthy donors was submitted
for gene sequencing after target DNA was amplified. Cell lysates of
megakaryocytes from SLE-prone mice were examined with ELISA for increased Akt
phosphorylation downstream of c-mpl. The second part involved co-culture of a
murine MM cell line with selected primary HNCs. After determining optimal cell
confluence at which MOPCs depend on external growth factors, the number of MKs
available for seeding was improved by combination of BM culture, BSA density
gradient, staining of surface markers and manual cell separation using
magnetic immunobeads. Results: There was no evidence for a corresponding SNP
in samples extracted from SLE patients, not sufficient proof for increased
activation of Akt downstream signalling. Co-culture of megakaryocytes
demonstrated that MKs support growth and survival of MOPC during nutrient
deprivation. The same effect was observed for granulocytes, however not to the
same extent. It was also confirmed that the expression profile of CD138 is a
potential marker of very early apoptosis. Discussion: Results from the co-
culture experiments confirm that MKs have a pivotal influence on PC survival.
Extraction of sufficient numbers of MKs proved to be the most challenging
aspect of these series of experiments and future studies should aim to
optimize efficiency of cell recovery further. Granulocytes also showed a
positive effect on PC survival; subsequent research should focus on the
examination of distinct subpopulations, including eosinophils and basophils.
As several factors are involved in the multi-component survival niche, there
is a plethora of prospective therapeutic strategies for the treatment of
autoimmune or malignant diseases linked with LLPCs.
de
dc.description.abstract
Einleitung: Autoimmunerkrankungen wie SLE sind durch pathogene Antikörper und
bösartige Neubildungen wie das multiple Myelom durch abnormale PCs
charakterisiert, deren Persistenz auf langlebige Plasmazellen zurückgeführt
werden kann. Letztere benötigen ein spezifisches Milieu aus Stromazellen,
hämatopoetischen Stammzellen und Zytokinen. MKs stellen eine wichtige
Komponente dieser Überlebensnische dar. TPO ist der essenzielle
Wachstumsfaktor für MKs und c-mpl sein Rezeptor. Veränderungen in der
Megakaryopoese können die Überlebensbedingungen für LLPCs in der Nische
beeinflussen. Unsere Arbeitsgruppe hat einen SNP in der essenziellen
Bindungsdomäne von c-mpl in einem SLE Mausmodell gefunden und der erste Teil
dieser Arbeit beabsichtigt, eine ähnliche Mutation in SLE Patienten zu finden.
Der zweite Teil beurteilt den Effekt von HNCs in Co-Kultur mit murinen
Plasmozytomzellen. Methodik: Genomische DNA von 40 SLE Patienten wurde
isoliert, sequenziert und mit DNA von 15 gesunden Probanden verglichen. MKs
aus einem SLE Mausmodell wurden anhand von ELISA auf erhöhte Akt
Phosphorylierung downstream von c-mpl untersucht. Im Folgenden wurden murine
MM Zellen mit ausgewählten HNCs kultiviert. Nach Bestimmung der optimalen
Zelldichte wurde die Anzahl verfügbarer MKs durch Knochenmarkskultur, BSA
Dichte Gradienten, Färbung von Zelltypmarkern und magnetischer Zelltrennung
optimiert. Ergebnisse: Es gab keinen Anhalt für einen entsprechenden SNP in
den gewonnenen Proben, eine vermehrte Aktivierung der Akt Signalkaskade konnte
nicht eindeutig belegt werden. Co-Kultur von MKs zeigte, dass diese Wachstum
und insbesondere Überleben von MOPCs unter suboptimalen Bedingungen
unterstützen. Ein ähnlicher Effekt wurde auch für Granulozyten beobachtet. Des
Weiteren bestätigte sich auch die Rolle von CD138 als möglichen Indikator für
sehr frühe Apoptose. Diskussion: Die Ergebnisse der Co-Kulturen bestätigten,
dass MKs einen bedeutenden Einfluss auf das Überleben von Plasmazellen haben.
Die Isolation von MKs in ausreichenden Zahlen war eines der anspruchsvollsten
Aspekte dieser Arbeit und sollte in zukünftigen Studien weiter optimiert
werden. Granulozyten zeigten ebenso einen positiven Effekt, nachfolgende
Arbeiten sollten sich auch auf Unterpopulationen wie Eosinophile oder
Basophile konzentrieren. Da mehrere Faktoren die Überlebensnische
beeinflussen, gibt es eine Fülle an möglichen neuen Optionen für die
Behandlung von LLPC-assoziierten autoimmunen oder neoplastischen Erkrankungen.
de
dc.rights.uri
http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen
dc.subject
megakaryocytes
dc.subject
megakaryocytopoiesis
dc.subject
long-lived plasma cells
dc.subject
multiple myeloma
dc.subject.ddc
600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit
dc.title
Influence of megakaryocytes and megakaryocytopoiesis on plasma cell survival
dc.contributor.firstReferee
N.N.
dc.contributor.furtherReferee
N.N.
dc.date.accepted
2018-03-02
dc.identifier.urn
urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000106122-1
dc.title.translated
Einfluß von Megakaryozyten und der Megakaryozytopoese auf das Überleben von
Plasmazellen
de
refubium.affiliation
Charité - Universitätsmedizin Berlin
de
refubium.mycore.fudocsId
FUDISS_thesis_000000106122
refubium.mycore.derivateId
FUDISS_derivate_000000022964
dcterms.accessRights.dnb
free
dcterms.accessRights.openaire
open access