Dissertationen

1, 25 dihydroxyvitamin D3 inhibits the proliferation of thyroid anaplastic cancer stem-like cells via cell cycle arrest without affecting apoptosis

2013-01-01T00:00:00Z

1, 25 dihydroxyvitamin D3 inhibits the proliferation of thyroid anaplastic cancer stem-like cells via cell cycle arrest without affecting apoptosis Peng, Wen Failure of traditional cancer therapy to eradicate anaplastic thyroid cancers is mainly due to resistance of cancer stem cells (CSCs), which are responsible for cancer initiation, progression, metastasis and drug resistance. Anticancer effects of vitamin D compounds have been indicated by considerable data, including on thyroid anaplastic cancer cells. However, there is still a lack of understanding of the effects of vitamin D on thyroid CSCs or cancer stem- like cells. To uncover the effects of vitamin D on thyroid anaplastic cancer stem-like cells, a sphere formation assay was performed in HTh74 cells and a derived doxorubicin resistant cell line HTh74R. Cell cycle arrest and apoptotic analyses were employed in thyroid cancer stem-like cells derived from both cell lines with flow cytometry. Furthermore, the putative pro- differentiation effects of vitamin D were explored by morphological characteristics and an investigation of mRNA expression profile. The present study demonstrated the antiproliferative effects of calcitriol on anaplastic thyroid cancer cell line HTh74 and its derived cancer stem-like cells. Sphere formation from HTh74 cells was significantly suppressed by calcitriol intervention. G2/M cell cycle arrest without enhanced apoptosis was involved in the mechanism of growth arrest of HTh74 stem-like cells. Calcitriol showed a similar inhibitive effect in the doxorubicin resistant HTh74 cell line HTh74R and its derived cancer stem-like cells. In addition, cell morphological changes implied a pro-differentiation role of calcitriol on thyroid anaplastic stem-like cells, despite the absence of the gene expression profile changes. In conclusion, the in vitro antiproliferative effect of calcitriol in anaplastic thyroid cancer stem-like cells was illustrated. Further studies are necessary to explore the underlying mechanism for the effect of growth arrest and to uncover the differentiation-inducing effect of calcitriol on thyroid CSCs.; Ein wesentlicher Grund für das Versagen der traditionellen Tumortherapie in der Behandlung anaplastischer Schilddrüsenkarzinome ist die Resistenz gegenüber so genannten cancer stem cells (CSC). Diese sind verantwortlich für die Tumorinitiierung, -progression, die Metastasierung und die Resistenz gegenüber Chemotherapeutika. Die Wirksamkeit von Vitamin D-Präparaten in der Tumortherapie wurde durch zahlreiche Untersuchungen, einschließlich Untersuchungen an Schilddrüsenkarzinomzellen, belegt. Unbekannt ist jedoch die Wirkung von Vitamin D auf Schilddrüsen-CSCs oder -carcinomstammzell-ähnliche Zellen. Um die Wirksamkeit von Vitamin D auf Stammzell-ähnliche Zellen von anaplastischen Schilddrüsenkarzinomen zu untersuchen, wurde ein so genannter Sphere-Formation-Assay an HTh74-Zellen und der Doxorubicin-resistenten Zelllinie HTh74R durchgeführt. Zellzyklusanalysen und Apoptoseuntersuchungen wurden in diesen Stammzell-ähnlichen aus beiden Zelllinien isolierten Zellen mit Flow-Zytometrie-Methoden durchgeführt. Ferner wurde ein möglicher Differenzierungseffekt von Vitamin D durch Nachweis morphologischer Veränderungen und durch Untersuchungen von mRNA-Expressionsprofilen untersucht. Die vorliegende Studie zeigte einen antiproliferativen Effekt des Vitamin-D-Präparates Calcitriol auf die anaplastische Schilddrüsenkarzinomzelllinie HTh74 und die von dieser Zelllinie abgeleiteten Carcinomstammzell-ähnlichen Zellen. Die Bildung von Spheren aus HTh74-Zellen wurde signifikant unterdrückt durch die Gabe von Calcitriol. Es fand sich ein G2/M-Zellzyklusarrest; eine gesteigerte Apoptose war in der Wachstumshemmung der HTh74-Stammzell-ähnlichen Zellen jedoch nicht nachweisbar. Calcitriol zeigte ähnliche wachstumshemmende Effekte in der Doxorubicin-resistenten HTh74-Zelllinie HTh74R. Veränderung der Zellmorphologie deuteten auf einen positiven Effekt von Calcitriol auf die Differenzierung der von anaplastischen Schilddrüsenkarzinomen abgeleiteten Carcinomstammzell-ähnlichen Zellen hin, obwohl Veränderungen der Gen-Expressionsprofile nicht nachweisbar waren. Zusammenfassend wurde in vitro ein antiproliferativer Effekt von Calcitriol auf die Stammzell-ähnlichen Zellen anaplastischer Schilddrüsenkarzinome nachgewiesen. Weitere Studien sind notwendig, um die zugrunde liegenden Mechanismen der Wachstumshemmung und den Differenzierungs-induzierenden Effekt von Calcitriol auf Schilddrüsenkarzinom-Stammzellen aufzuklären.

1,1,2-Triarylalkene als passive Estrogenrezeptorantagonisten

2002-01-01T00:00:00Z

1,1,2-Triarylalkene als passive Estrogenrezeptorantagonisten Lubczyk, Veronika Tamoxifen (TAM), das in der Behandlung des hormonabhängigen Mammakarzinoms eingesetzt wird, ist ein Prodrug, das durch Hydroxylierung in 4-Position des A-Rings zum 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) aktiviert wird. Dieses besitzt einen 8-fach höheren RBA-Wert als TAM und ist ein reines Antiestrogen an hormonabhängigen Brustkrebszellen, dessen Wirkung durch die Dimethylaminoethoxy-Seitenkette in 4-Position des B-Rings vermittelt wird. Da eine Reihe O-acylierter Triarylalkenderivate jedoch eine schwache aber signifikante antagonistische Wirkung auch ohne eine basische Seitenkette aufwies, war ein Ziel dieser Arbeit die Notwendigkeit einer solchen Seitenkette für die antagonistische Wirkung auf molekularer Ebene zu untersuchen. Hierzu wurden 1,1-Bis(4-hydroxyphenyl)-2-phenylalkene (BisOHR), 1,1,2-Tris(4-hydroxyphenyl)alkene (TrisOHR), 1-(3-Fluor-4-hydroxyphenyl)-1,2-bis(4-hydroxyphenyl)alkene (FTrisOHR) und deren O-Methylether mit unterschiedlich langen C2-Alkylseitenketten synthetisiert. Von BisOHPr und TrisOHPr und deren O-Methylethern wurden Derivate mit unterschiedlich substituierter C2-Propylseitenkette dargestellt. Von allen Verbindungen wurden die Affinität zum ER, die agonistische und antagonistische Wirkung an der hormonabhängigen MCF-7-2a-Zelllinie sowie die Proliferationshemmung an in vitro Testmodellen untersucht. Die Rezeptoraffinität und die antagonistische Wirkung zeigten eine eindeutige Abhängigkeit von der Art und Länge der Seitenkette an C2. Die erfolgreichsten Verbindungen waren BisOHEt, TrisOHEt sowie FTrisOHBu, die eine 4-OHT vergleichbare antagonistische Wirkung auf molekularer Ebene zeigten. Aufgrund der fehlenden Seitenkette kann diese Wirkung nicht nach dem für 4-OHT vorgeschlagenen Mechanismus vermittelt werden. Ein möglicher Wirkmechanismus ist der kürzlich für ein Tetrahydrochrysenderivat vorgeschlagene „ passive " Antagonismus. Die antiproliferative Wirkung konnte nicht mit der Länge der Seitenkette korreliert werden. Die erfolgreichsten antiproliferativen Verbindungen waren BisOMePrNH2 und TrisOMePrNH2, die sogar eine zytozide Wirkung an MCF-7-Zellen aufwiesen. Ferner wurden Voruntersuchungen zur Fluoreszenzmarkierung von ER-Liganden durchgeführt. Die Konjugation eines Triarylalkens mit einem Fluoreszenzfarbstoff erschien als besonders geeignete Methode, da die Molekülgeometrie des Triarylalkens auf diese Weise nicht beeinflusst wird. Im Hinblick auf eine potentielle Anwendung in der Fluoreszenzkorrelationsspektroskopie (FKS) wurde Rhodamin B als Fluoreszenzfarbstoff eingesetzt. Dieser wurde über einen Hexylspacer mit den Triarylalkenen verbunden. Die resultierenden fluoreszenzmarkierten Triarylalkene 27 und 33Z erwiesen sich jedoch aufgrund ihrer geringen Rezeptoraffinität und ihrer Fluoreszenzcharakteristika nicht als geeignet für den Einsatz in der FKS.; Tamoxifen (TAM) is widely used in the treatment of hormone dependent breast cancer. TAM itself acts as prodrug, which is activated by hydroxylation of the 4-position of the A-ring. The resulting 4-hydroxytamoxifen (4-OHT) possesses an 8 times higher binding affinity to the estrogen receptor (ER) and acts as pure anti-estrogen in hormone dependent tumor cells. The dimethylaminoethoxy side chain in 4-position of the B-ring seems to be crucial for the anti- estrogenic activity. As it could be previously shown a series of O-acyl triarylalkene derivatives possessed weak but significant antagonistic effects, without bearing a basic side chain. Therefore in this work the necessicity of a basic side chain for the antagonistic effects of triarylalkenes was examined on molecular level. According to this 1,1-Bis(4-hydroxyphenyl)-2-phenylalkenes (BisOHR), 1,1,2-Tris(4-hydroxyphenyl)alkenes (TrisOHR), 1-(3-Fluor-4-hydroxyphenyl)-1,2-bis(4-hydroxyphenyl)alkenes (FTrisOHR) and the corresponding O-methylethers with different C2-alkyl side chains were synthesized. Additionally BisOHPr and TrisOHPr derivatives with different functional groups at the alkyl side chain were synthesized. Receptor binding affinity, agonistic and antagonistic properties on the MCF-7-2a hormone dependent breast cancer cell line and the cytotoxic properties were examined. Receptor binding affinity and antagonistic properties were influenced by the length and the functional groups at the end of the side chain at C2. The most active compounds BisOHEt, TrisOHEt and FTrisOHBu possessed similar antagonistic properties on molecular level as 4-OHT. These strong antagonistic effects cannot be mediated by the mode of action that is known for 4-OHT, as the examined compounds do not bear a basic side chain. It might rather be assumed that the antagonistic properties are exerted by a mode of action termed " passive " antagonism which was proposed recently for a tetrahydrochrysene derivative. The cytotoxic properties could not be correlated with the length of the C2-alkyl side chain. The most active compounds were the O-methylated amines BisOMePrNH2 and TrisOMePrNH2 which showed even cytocidal effects on MCF-7 cells. Furthermore investigations on the fluorescence labelling of ER-ligands were carried out. To achieve this goal conjugation of a triarylalkene with a fluorescent probe seemed the most suitable method. Two positions of the triarylalkene scaffold were chosen for conjugation by overlay with E2. Regarding an application of the conjugates in fluorescence correlation spectroscopy the triarylalkenes were connected with rhodamine b by means of a hexyl spacer. The resulting compounds 27 and 33Z still require optimisation according to ER-affinity and fluorescence characteristics in view of their future application. ### * Inhaltsverzeichnis * Einleitung und Problemstellung * Synthetischer Teil * Analytik der fluoreszenzmarkierten Verbindungen * Biochemischer Teil * Testergebnisse * Diskussion der Testergebnisse * Zusammenfassung * Experimenteller Teil * Anhang * Literaturverzeichnis

10 Jahre laparoskopische Appendektomie in einem Krankenhaus der Regelversorgung

2012-01-01T00:00:00Z

10 Jahre laparoskopische Appendektomie in einem Krankenhaus der Regelversorgung Kujajewski, Olaf Appendektomien gehören zu den häufigsten Eingriffen in der Allgemeinchirurgie. In Deutschland werden pro Jahr etwa 200.000 bis 300.000 Appendektomien durchgeführt. Dabei rückt immer mehr die laparoskopische Operation in den Vordergrund. Man kann davon ausgehen, dass heute über die Hälfte aller Appendektomien minimalinvasiv durch-geführt werden. Trotz der großen Zahl dieser Operationen und einer Vielzahl von Studien ist heute noch immer ungeklärt, ob die laparoskopische Appendektomie (LA) Vorteile gegenüber der offenen Appendektomie (OA) bringt, die über Jahrzehnte hinweg als Stan- dardeingriff praktiziert wurde. Ziel dieser Studie war es, zum einen den Unterschied zwischen zwei laparoskopischen Verfahren (Endo-GIA und Röderschlinge) zu vergleichen, zum anderen aber auch den Unterschied zur OA aufzuzeigen. Zu diesem Zweck wurden retrospektiv die Daten von 1.639 Patienten ausgewertet, bei denen zwischen 1996 und 2005 eine Appendektomie durchgeführt worden war. Bei 930 Patienten (56,8%) kam das Endo-GIA zum Einsatz, bei 577 Patienten (35,2%) die Röderschlinge. Bei 41 Patienten (2,5%) wurde eine Konversion erforderlich. In 90 Fällen (5,5%) fand eine OA statt. Es konnte gezeigt werden, dass die LA im Hinblick auf OP-Dauer und stationäre Verweil- dauer sehr effizient durchgeführt werden kann. Die durchschnittlich kürzeste OP-Dauer ergab sich bei der LA mittels Endo-GIA (26,6 Min.), gefolgt von der OA (30,6 Min.) und der LA mittels Röderschlinge (33,3 Min.). Die kürzeste mittlere Verweildauer fand sich bei der Operation mittels Röderschlinge (5,0 Tage), gefolgt vom Endo-GIA (6,3 Tage) und der OA (7,1 Tage). Es ergab sich eine sehr niedrige Rate negativer Appendektomien von nur 3,0 Prozent. Gleichzeitig war auch die Perforationsrate mit einem Anteil von 7 bis 9 Prozent sehr ge-ring. Konversionen waren ebenfalls vergleichsweise selten erforderlich (2,5%). Auch hinsicht-lich der postoperativen Komplikationen schnitten die LA-Verfahren gut ab. Vor allem Wundinfektionen waren eher selten (0,4 % bei Röderschlinge; 0,6 % beim Endo-GIA; 2,2% bei OA). Fälle von intraabdominellen Abszessen waren bei den LA-Verfahren ähn-lich häufig wie bei der OA (1,2 % bei Röderschlinge; 0,9% beim Endo-GIA; 1,1% bei OA). Die meisten Appendektomien wurden von Oberärzten durchgeführt (79,9%). Immerhin 152 Patienten (9,3%) wurden jedoch von Assistenzärzten operiert. Dabei zeigten sich keine ungünstigen Einflüsse auf den Ausgang der OP. Die OP-Dauer war bei den Assistenten im Mittel zwar 12,1 Minuten länger als bei den erfahrenen Oberärzten, ein negativer Einfluss auf die Verweildauer oder auf die Komplikationen konnte jedoch nicht festgestellt werden. Die Rate der postoperativen Komplikationen war bei den Assistenten mit 1,3 Prozent sogar deutlich geringer als bei den anderen Arztgruppen mit 4,9 bis 5,6 Prozent. Beim Vergleich der intraoperativ erhobenen makroskopischen Befunde mit den histologi-schen fiel auf, dass der makroskopisch blanden Appendix in über der Hälfte der Fälle eine Appendizitis zugrundelag. Die vielfach geäußerte Hypothese, dass mit zunehmender Behandlungslatenz das Perfora-tionsrisiko ansteigt, konnte nicht bestätigt werden. Das Intervall zwischen dem Beginn der Symptomatik und der stationären Aufnahme ließ keine eindeutige Tendenz in dieser Richtung erkennen. Insgesamt konnte gezeigt werden, dass die Appendektomie auch laparoskopisch effizient und sicher durchgeführt werden kann. Dies gilt auch für das etwas kostengünstigere Ver-fahren mittels Röderschlinge. Das laparoskopische Verfahren ist zumindest als gleichwertig mit der OA zu betrachten. Vom kosmetischen Befund her sowie im Hinblick auf die Differentialdiagnose ist jedoch in jedem Fall die LA überlegen. Vor dem Hintergrund, dass sich laparoskopische Operationen im Allgemeinen immer mehr etablieren, plädieren wir klar für die LA, die sich auch als risikoarme Anfänger-OP eignet.; Appendectomies are one of the most commonly practiced surgical procedures in the field of General Surgery. In Germany, around 200,000 to 300,000 appendectomies are carried out every year. The spotlight is increasingly being turned to laparoscopic surgeries as time progresses. It may be assumed that over one half of all appendectomies are carried out with minimal invasive procedures. Despite the large number of these operations and a large range of studies available in this regard, it is still not completely clear whether laparoscopic appendectomy (LA) enjoys greater advantages over open appendectomy (OA) which has been practiced as the standard surgical procedure for over several decades. The aim of this study was to compare the two laparoscopic procedures (endo-GIA and endo-loop) on one hand and to compare these with OA on the other hand. For this purpose, the data of 1639 patients was retrospectively assessed who underwent appendectomy between 1996 and 2005. In 930 patients, (56.8%), Endo-GIA was made use of whereas in 577 patients (35.2%) endo-loop was made use of. In 41 patients (2.5%), a conversion was required. In 90 cases (5.5%), an OA was carried out. It could be shown that LA could be carried out very efficiently with respect to the OP and inpatient stay duration. The shortest OP duration on average was noted for LA with endo- GIA (26.6 min), followed by OA (30.6 min.) and LA with endo-loop (33.3 Min.). The shortest average inpatient stay period was noted for the operation with endo-loop (5.0 days), followed by endo-GIA (6.3 days) and OA (7.1 days). Only in a very small number of cases, negative appendectomies were recorded (3 percent). The perforation rate was also very low (7 to 9 percent). Conversions were required only in a few cases (2.5%). Also in respect to the postoperative complications, the LA procedure showed some good results. Wound infections, in particular, were very rare (0.4 % with endo-loop; 0.6 % with endo-GIA; 2.2% in case of OA). Cases of intra-abdominal abscesses were observed as frequently for the LA procedure as for OA (1.2 % with endo-loop; 0.9% with endo-GIA; 1.1% with OA). Most of the appendectomies were carried out by senior physicians (79.9%). However, 152 patients (9.3%) were operated by assistant doctors. This factor had no undesirable influence on the outcome of the OP. The OP duration was, however, longer for patients operated by assistant doctors (12.1 minutes longer on average) than for patients operated by the experienced senior physicians. No negative effect was noted on the inpatient stay duration however. The rate of postoperative complications was slightly lower in patients operated by the assistant doctors (1.3 % lower) than in the other group of patients (4.9% to 5.6%). When the results of the intra-operative macroscopic diagnosis were compared with the histological findings, it was noted that in over one half of the cases with macroscopically bland appendix, the patient was suffering from appendicitis. The frequently expressed hypothesis that the perforation risk rises with increasing latency could not be confirmed. The interval between onset of symptoms and hospitalisation did not exhibit a clear trend. On the whole, it could be shown that laparoscopic appendectomy can also be carried out efficiently and safely. This also applies to the cost-efficient LA procedure involving endo-loop. The laparoscopic surgical procedure shall be considered at least on par with OA. With respect to the cosmetic results and differential diagnosis however, LA is indeed a more preferable surgical procedure. Given the fact that laparoscopic operations are becoming more common with time, we recommend the LA which is also suitable as a low-risk beginner’s operation.

10 Jahre Zwillingsgeburten in der Charité am Campus Virchow Klinikum

2012-01-01T00:00:00Z

10 Jahre Zwillingsgeburten in der Charité am Campus Virchow Klinikum Neissner, Philipp In unserer retrospektiven Auswertung von 1.239 Zwillingsgeburten nach maternalen Charakteristika an einem perinatalen Zentrum Level 1 in der Charité Universitätsmedizin Berlin, am Campus Virchow-Klinikum konnte gezeigt werden, dass in dem Untersuchungszeitraum die Anzahl der Zwillingsgeburten, sowohl die der spontan entstandenen als auch die nach Sterilitätsbehandlung zugenommen haben. Jedoch wurde eine deutlich vermehrte Zunahme bei den sterilitätsbehandelten Müttern festgestellt. Auch konnte gezeigt werden, dass das maternale Durchschnittsalter bei den sterilitätsbehandelten Müttern signifikant höher und die mittlere SSW bei Geburt signifikant niedriger lag. Zusätzlich konnte eine stetige Zunahme des maternalen Durchschnittsalters im beobachteten Zeitraum analysiert werden, mit einem stärkeren Anstieg des maternalen Alters von 3,2 Jahren bei den Zwillingsschwangeren mit Sterilitätsbehandlung. Im Vergleich nahm das maternale Durchschnittsalter der Zwillingsmütter mit spontan entstandenen Zwillingen nur um 1,7 Jahre zu. Ebenfalls konnte ermittelt werden, dass der Anteil an Zwillingsschwangeren nach Sterilitätsbehandlung, die entbunden wurden, mit 35 % über ein Drittel aller Zwillingsschwangerschaften in dem hier untersuchten Kollektiv ausmachte und diese Tendenz steigend ist. Während des gesamten Untersuchungszeitraumes kam es zu keinem maternalen Sterbefall im Gesamtkollektiv. In unserer Arbeit konnten zwischen den beiden Gruppen „Sterilitätsbehandlung“ und „spontan“ in folgenden Kategorien keine signifikanten Unterschiede festgestellt werden: BMI vor Konzeption, Gewichtsdifferenz Beginn/Ende der Schwangerschaft, Gestationsdiabetes, SIH, Präeklampsie, HELLP-Syndrom, primäre Sektio, eilige Sektio, Notsektio, 1. Kind spontan/ 2. Kind sekundäre Sektio und Dammriss. Allerdings konnte gezeigt werden, dass es bei den sterilitätsbehandelten Zwillingsmüttern in folgenden Kategorien zu einem signifikant höheren Vorkommen gekommen ist: Anteil ≥ 35-Jährigen, maternale Größe, Chorionverhältnisse DC-DA, präpartale Blutungen, vorzeitige Zervixreifung, Fruchtblasenprolaps, vorzeitiger Blasensprung, DC: Frühgeburtlichkeit < 37 vollendete SSW, DC: Frühgeburtlichkeit < 32 vollendete SSW, Sektiorate insgesamt, sekundäre Sektio, postpartale Blutungen, Anämie im Wochenbett und Hypothyreose. Zusammenfassend konnten wir in unserer Arbeit feststellen, dass es bei Müttern, die durch eine Sterilitätsbehandlung mit Zwillingen schwanger wurden, zu signifikant höheren prä- und perinatalen maternalen Komplikationen gekommen ist als bei Müttern mit spontan entstandenen Zwillingen.; Mothers of twins after FT appear to be significantly older, have higher prematurity- and C-section-rates as well as higher obstetrical morbidity compared to those spontaneously conceived.