id,collection,dc.contributor.author,dc.contributor.firstReferee,dc.contributor.furtherReferee,dc.contributor.gender,dc.date.accepted,dc.date.accessioned,dc.date.available,dc.date.embargoEnd,dc.date.issued,dc.description,dc.description.abstract[de],dc.description.abstract[en],dc.identifier.uri,dc.identifier.urn,dc.language,dc.rights.uri,dc.subject,dc.subject.ddc,dc.title,dc.title.translated[en],dc.type,dcterms.accessRights.dnb,dcterms.accessRights.openaire,dcterms.format[de],refubium.affiliation[de],refubium.mycore.derivateId,refubium.mycore.fudocsId,refubium.mycore.transfer "8d6b2dd5-29c7-4735-ad3d-727546e91574","fub188/13","Kügler, Jan","Prof. Dr. med. Kai-Uwe Eckardt","Prof. Dr. Christof Dame||Prof. Dr. med. Armin Kurtz","n","2008-06-01","2018-06-07T21:24:18Z","2008-04-28T00:00:00.649Z","2007-01-12","2008","Gesamtdissertation","Für alle höheren Lebewesen ist es überlebensnotwendig, eine ausreichende Gewebeperfusion und -oxygenierung sicherzustellen. Zwei der wichtigsten körpereigenen Systeme zur Aufrechterhaltung der Sauerstoffversorgung und Gewebeperfusion sind die Hypoxie-induzierbaren Transkriptionsfaktoren (HIF)-1 und -2, die durch eine Veränderung der Genexpression die Anpassung an eine verminderte Sauerstoffzufuhr vermitteln, und das Renin-Angiotensin-System (RAS), das Blutdruck und Plasmavolumen reguliert, besonders bei Überaktivität aber auch zu (pathologischen) Veränderungen der Genexpression führen kann. Tierexperimentelle Studien weisen auf ein Interaktion zwischen HIF und dem RAS hin. In der vorliegenden Arbeit wurde die Regulation der Ang II Rezeptoren Typ 1 (AT1R) und Typ 2 (AT2R) durch Hypoxie und ihre molekularen Grundlagen eingehend analysiert. Umgekehrt wurde der Effekt einer Ang II-Stimulation auf die HIF-Stabilisierung untersucht. RNase-Protection-Assays dienten zur Messung von mRNA-Gehalten, Western-Blot-Analysen und Rezeptorbindungsstudien zu Darstellung von HIF bzw. der ATR-Proteinexpression. In verschiedenen Zelllinien (PC12W, 3T3-L1) und aortalen Gefäßmuskelzellen der Ratte (RASMCs) wurde die AT1R-Expression auf mRNA- und Proteinebene durch akute Hypoxie (16 h, 0,5% O2) und chemische HIF-Stabilisatoren deutlich reduziert. Ebenso wurde der AT2R in PC12W- und 3T3-L1-Zellen durch Hypoxie und Hypoxie-Mimetika herabreguliert. In vivo reduzierte Hypoxie in Ratten organspezifisch die AT1R- Expression. Am Beispiel des AT2-Rezeptors wurde nachgewiesen, dass für die verminderte mRNA-Expression unter Hypoxie eine de-novo Proteintranslation nötig ist. In Gelshift-Analysen konnte eine Bindung von Kernproteinen an die drei potenziellen HIF-Bindungsstellen im AT2R-Gen nachgewiesen werden. Diese Bindung war zwar nicht hypoxieabhängig, konnte jedoch durch Kompetition mit einer Sonde für die HIF-Bindungsstelle des Erythropoetin-Gens, einem bekannten HIF-Zielgen, unterbunden werden. In RASMCs konnte eine Induktion von HIF-1(-Protein durch eine hohe Dosis Ang II, PMA oder Serum gezeigt werden, die vermutlich auf einer transkriptionellen und/oder translationalen Induktion von HIF-1 alpha beruht. Ang II hatte keinen Effekt auf HIF-2 alpha in RASMCs sowie HIF-1 alpha und -2 alpha in kardialen Ratten-Fibroblasten. Die Ergebnisse dieser Arbeit zeigen, dass die in Tierversuchen beschriebene ATR- Induktion bei chronischer Hypoxie wahrscheinlich nicht auf die direkte Wirkung von HIF zurückzuführen ist, umgekehrt Ang II jedoch die HIF-Aktivierung beeinflussen kann. Diese Ergebnisse erleichtern die Interpretation tierexperimenteller und klinischer Befunde und sind eine wichtige Grundlage für weiterführende Studien in vivo.","All higher species depend on sufficient tissue oxygenation. Two of the most important systems to regulate tissue perfusion and oxygen supply are the Renin-Angiotensin-System and the Hypoxia Inducible Factors (HIF). Certain data from in vivo studies hinted towards a hypoxia-dependent induction of Angiotensin II Receptors. The aim of this study was to analyze the Angiotensin II type1 (At1r) and Angiotensin II type 2 (At2) receptor expression during hypoxia in cell culture models and to identify a possible involvement of HIF in this regulation. Acute hypoxia decreased At1r-mRNA, as determined by RNase- Protection-Assay, and At1r- protein expression, as determined by Ang II- binding-assay, in rat aortic smooth muscle cells (RASMC) while At1r-expression stayed unchanged in rat cardiac fibroblasts (rFib). Hypoxia also reduced At2r- mRNA and protein levels in PC12W- and 3T3L1-cells. Certain chemical substances, known to induce HIF, reduced Atr-expression in a comparable manner. The reduction of At2r-mRNA expression was dependent on de novo-protein synthesis. Three possible HIF-binding-sites were identified in the At2r-gene. These binding sites were further analyzed by electrophoretic mobility shift assay. No hypoxia-dependent change of nuclear- protein-binding was detectable. HIF-protein-induction after stimulation with Angiotensin II and Proteinkinase C activators was analyzed in western blot experiments. Ang II as well as Proteinkinase C activation induced HIF-1 alpha-Protein in RASMC although protein levels stayed below the HIF-1 alpha -Protein induction by hypoxia. This induction of HIF-1 alpha -Protein was partly due to an increased transcription of HIF-1 alpha -mRNA. HIF-1 alpha was not induced by Ang II in any other cell-type nor was HIF-2 alpha induced by Ang II or Proteinkinase C activation. In conclusion, these data provide evidence that the up regulation of Angiotensin receptors in animal models and remodeling is most likely not a direct effect of hypoxia but rather attributable to the complex reactions to systemic hypoxia or tissue injury in vivo.","https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/7856||http://dx.doi.org/10.17169/refubium-12055","urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000003425-8","ger","http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen","Renin-Angiotensin-System||AT1R||AT2R||Hypoxia||HIF","600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit::610 Medizin und Gesundheit","Interaktion zwischen der durch Hypoxie-induzierbare Transkriptionsfaktoren vermittelten Genexpression und Komponenten des Renin-Angiotensin-Systems","Interactions between Hypoxia-Inducible-Factor regulated gene expression and components of the Renin-Angiotensin-System","Dissertation","free","open access","Text","Charité - Universitätsmedizin Berlin","FUDISS_derivate_000000003425","FUDISS_thesis_000000003425","http://www.diss.fu-berlin.de/2008/268/"