id,collection,dc.contributor.author,dc.contributor.firstReferee,dc.contributor.furtherReferee,dc.contributor.gender,dc.date.accepted,dc.date.accessioned,dc.date.available,dc.date.embargoEnd,dc.date.issued,dc.description,dc.description.abstract[de],dc.description.abstract[en],dc.identifier.uri,dc.identifier.urn,dc.language,dc.rights.uri,dc.subject,dc.subject.ddc,dc.title,dc.title.translated[en],dc.type,dcterms.accessRights.dnb,dcterms.accessRights.openaire,dcterms.format[de],refubium.affiliation[de],refubium.mycore.derivateId,refubium.mycore.fudocsId,refubium.mycore.transfer "2483a74a-091f-4576-8325-83cc853b5382","fub188/14","Szotowski, Björn Henning","Prof. Dr. Mathias Melzig","Prof. Dr. Ursula Rauch-Kröhnert","n","2007-08-29","2018-06-07T16:39:12Z","2007-09-08T00:00:00.649Z","2007-09-12","2007","Titel und Inhaltsverzeichnis 1\. Einleitung 2\. Zielsetzung 3\. Material und Methoden 4\. Ergebnisse 5\. Diskussion 6\. Zusammenfassung 7\. Summary 8\. Abkürzungsverzeichnis 9\. Literaturverzeichnis 10\. Publikationen 11\. Danksagung","Inflammatorische Prozesse können zu Veränderungen des hämostatischen Gleichgewichts des Endothels führen. Tissue Factor (TF) nimmt dabei als Initiator des Blutgerinnungssystems eine bedeutende Funktion ein. So ließ sich eine Induktion von TF in Endothelzellen nachweisen, die durch proinflammatorische Zytokine ausgelöst wurde, wodurch sich ihre Thrombogenität steigerte. Neuere Arbeiten beschreiben eine alternativ gespleißte TF-Isoform, die nicht mehr membranständig, sondern löslich ist. Ob in Endothelzellen die Expression dieser TF-Isoform bzw. ihre Freisetzung durch spezifische Agonisten induziert werden kann, ist noch nicht untersucht worden, ebenso wie die Frage, ob die lösliche TF-Isoform zur zellulären Thrombogenität beiträgt. Daher wurde in dieser Arbeit die Wirkung der Zytokine TNF-alpha und IL-6 auf die Expression von TF und seiner alternativ gespleißten Isoform in Endothelzellen erforscht. Ferner wurde das prokoagulatorische Potential des löslichen TF mit dem von Mikropartikel (MP)-assoziiertem TF verglichen. Nach Stimulation mit den proinflammatorischen Zytokinen kam es zu einer raschen mRNA-Expression der Isoform, wohingegen die Induktion von ""full-length"" TF zeitlich verzögert auftrat. Die Behandlung mit Zytokinen führte somit zu einer unterschiedlichen Expression von TF und seiner Isoform. Die lösliche TF-Isoform wurde nach Stimulation mit Zytokinen aus den Zellen in den Überstand sezerniert. Dort förderte sie die Bildung von F Xa in Gegenwart von Phospholipiden. Die Ergebnisse aus Inhibitionsversuchen dieser Arbeit geben Anlass zur Vermutung, dass das alternative Spleißen von TF auf eine durch CDC2-ähnliche- Kinasen (CLK)-vermittelte Phosphorylierung von SR-Proteinen zurückzuführen ist. Antiproliferative Therapien wie bspw. die Strahlentherapie sind mit dem klinisch bedeutsamen Auftreten von Gewebsthrombosen und -fibrosen assoziiert. Im zweiten Teil der vorliegenden Arbeit wurde daher die Wirkung ionisierender Strahlung auf die endotheliale TF-Expression untersucht. Ionisierende Strahlung führte im zeitlichen Verlauf zu einem gleichmäßigen Anstieg der mRNA-Expression beider TF-Isoformen und induzierte keine differentielle Expression. Die Stimulation bereits bestrahlter Zellen mit TNF-alpha führte zu einer verstärkten Freisetzung thrombogener MP. Ihre Freisetzung korrelierte positiv mit der Apoptoserate stimulierter Zellen sowie mit der Bildung reaktiver Sauerstoff-Spezies. Beim Vergleich des prokoagulatorischen Potentials von löslichem TF und MP-assoziiertem TF erwies sich asTF trotz seiner Fähigkeit zur Umsetzung von F X zu Xa als weniger bedeutsam. Allerdings könnte die alternativ gespleißte TF-Isoform auf Grund ihrer frühen Freisetzung als prognostischer Marker für ein hämostatisches Ungleichgewicht des Endothels bei entzündungsbedingten Erkrankungen dienen. Zusätzlich wurde in dieser Arbeit der Einfluss der Antioxidantien Pyrrolidindithiocarbamat (PDTC) und N-Acetylcystein (NAC) auf die strahlungs- und TNF-alpha-induzierte Expression der TF-Isoformen untersucht. Die Vorbehandlung mit dem Antioxidans PDTC führte zu einer deutlicheren Reduktion von ROS als mit NAC und verminderte die Apoptoserate stimulierter Zellen, wodurch die Freisetzung thrombogener MP reduziert wurde. Antioxidantien könnten sich daher als nützliche Begleitmedikation erweisen, um nach Bestrahlung bzw. bei entzündlichen Erkrankungen vor thrombotischen Ereignissen zu schützen.","In the pathogenesis of vascular disease, inflammation and coagulation play a pivotal role. Inflammatory processes have been shown to alter the hemostatic balance of endothelial cells (ECs). Various studies demonstrated proinflammatory cytokines to induce tissue factor (TF), known as the initiator of the extrinsic coagulation pathway in ECs, thereby increasing their thrombogenic potential. Recently, alternatively spliced TF (asTF), a soluble isoform of TF, has been discovered, possibly contributing to procoagulability. Whether ECs express this TF variant and whether there are agonists that induce asTF expression and its release, is yet unknown. Therefore, this study examined the effects of the proinflammatory cytokines tumor necrosis factor- alpha (TNF-alpha) and interleukin-6 (IL-6) and on the endothelial expression of this TF variant and delineates the impact of asTF on the procoagulability of extracellular fluids in comparison with the procoagulant potential of microparticle (MP)-associated TF. AsTF mRNA was found to be rapidly induced after stimulation with proinflammatory cytokines, whereas induction of full-length TF mRNA expression was delayed, pointing to asTF to be differentially expressed after cytokine treatment. AsTF was released from endothelial cells and exhibited procoagulant activity in the presence of phospholipids. Removal of asTF from the supernatant revealed the procoagulant activity to be asTF associated. Results obtained from experiments using specific inhibitors suggested alternative splicing of TF to be mediated via phosphorylation of SR-proteins by CDC2-like kinase (CLK). Application of ionizing radiation (IR) is noted to be associated with organ thrombosis and fibrosis which are of clinical importance. However, IR-induced TF expression has not been linked to the occurrence of late thrombosis yet. In a second step the expression of both TF isoforms was thus examined in response to IR. A persistent induction of TF and asTF after IR was observed. Combined stimulation with IR and TNF-alpha led to an immense shedding of MP-associated TF. Comparing the procoagulability of asTF and TF-bearing MP, the soluble TF isoform, despite its ability to exhibit procoagulant properties in a phospholipid-rich environment, seems only to be of lesser importance for the the cellular procoagulability. With regard to its early release from ECs in response to TNF-alpha asTF may become important as a prognostic marker for an imbalanced endothelial hemostasis under inflammatory conditions. In addition, this study further investigated the effects of the antioxidants pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) and N-acetylcysteine (NAC) on the IR- and TNF-alpha induced expression of TF and its release from ECs. Antioxidative pretreatment markedly reduced ROS formation and inhibited apoptosis, thereby significantly reducing the shedding of thrombogenic microparticles. Thus, antioxidants may help to prevent thrombotic events after antiproliferative treatment such as IR or under inflammatory conditions such as sepsis respectively when used in combination with anticoagulants. These results may be a base for further investigations regarding the (patho-)physiological relevance of the alternatively spliced TF and its suitability as a clinical marker.","https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/2832||http://dx.doi.org/10.17169/refubium-7033","urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000003064-1","ger","http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen","tissue factor||procoagulability||cytokines||inflammation||endothelial cells","500 Naturwissenschaften und Mathematik::540 Chemie::540 Chemie und zugeordnete Wissenschaften","Die Bedeutung der Expression von Tissue Factor und seiner Isoform für die zelluläre Thrombogenität: Untersuchung an humanen Endothelzellen nach Stimulation mit inflammatorischen Zytokinen","The impact of inflammatory cytokines on the expression of tissue factor and its isoform in human endothelial cells and its implication on cellular procoagulability","Dissertation","free","open access","Text","Biologie, Chemie, Pharmazie","FUDISS_derivate_000000003064","FUDISS_thesis_000000003064","http://www.diss.fu-berlin.de/2007/613/"