id,collection,dc.contributor.author,dc.contributor.contact,dc.contributor.firstReferee,dc.contributor.furtherReferee,dc.contributor.gender,dc.date.accepted,dc.date.accessioned,dc.date.available,dc.date.issued,dc.description.abstract[de],dc.description.abstract[en],dc.identifier.uri,dc.identifier.urn,dc.language,dc.rights.uri,dc.subject.ddc,dc.title,dc.title.translated[en],dc.type,dcterms.accessRights.dnb,dcterms.accessRights.openaire,dcterms.format[de],refubium.affiliation[de],refubium.mycore.derivateId,refubium.mycore.fudocsId "45acd147-b50b-4cb1-b009-1929b3cbec63","fub188/13","Leucht, Stephan","stephan.leucht@charite.de","Prof. Dr. med. G. Gaedicke","Prof. Dr. med. A. Salama","n","2009-01-30","2018-06-08T01:06:03Z","2009-01-15T08:39:31.545Z","2009","In dieser Arbeit wurde das erste Mal eine Phage Display Bibliothek als Spiegelbild des Antikörperrepertoires einer Patientin mit Kawasaki-Syndrom nach Diagnosestellung aber vor Behandlung mit IVIG sowie 2 Monate nach Behandlung mit IVIG erstellt. Durch biopanning mit IVIG wurden diejenigen Fab- Phagen isoliert, welche intensiv von IVIG gebunden wurden. Bei den IVIG- selektierten Fab-Phagen der Phage Display Bibliothek vor Behandlung mit IVIG fiel auf, dass 5 der 11 sequenzierten Klone bei der schweren Kette das Keimbahngensegment DP54/V3-7 des Keimbahnlokus V3-07 nutzten. In den zufällig ausgewählten Klonen vor biopanning kam dieses Keimbahnsegment jedoch überhaupt nicht vor. In den CD-Regionen der schweren Kette dieser Klone kam es zu maximal einer Austauschmutation, was die Vermutung nahelegt, dass diese Klone nicht eine Antigenselektion durchlaufen haben, sondern vielleicht die Stimulation eines Superantigens außerhalb der antigenbindenden Region zur Vermehrung dieser Klone geführt hat. Im Vergleich der gewonnenen Sequenzen dieser Klone mit bereits bekannten Sequenzen aus Genbanken fand sich leider auch keine Homologie zu bekannten antiepithelialen Antikörpern. Aufgabe fortführender Arbeiten könnte hier die Etablierung eines ELISAs mit endothelialen Zellen sein, um die vielleicht vorhandene Interaktion dieser Klone mit Endothelzellen zu untersuchen und sie somit ursächlich mit der endothelialen Schädigung der Koronargefäße in Verbindung zu bringen. Die schweren Ketten von 5 der verbleibenden 6 IVIG-selektierten Klone der Phage Display Bibliothek vor Behandlung mit IVIG enstammten den Keimbahngenloki V3-23 und V3-30. Die schweren Ketten der 10 IVIG-selektierten Fab-Phagen der Phage Display Bibliothek 2 Monate nach Behandlung mit IVIG enstammten alle bis auf 3 den Keimbahngenloki V3-23 und V3-30. Bereits in den anderen Arbeiten unserer Arbeitsgruppe konnte eine Häufung dieser beiden Loki unter den IVIG- selektierten Fab-Phagen beobachtet werden. Obwohl diese beiden Keimbahngenloki im fetalen als auch im reifen Antikörperrepertoire am häufigsten genutzt werden, fand sich in den zufällig ausgewählten Klonen vor biopanning in dieser wie auch den vorangegangenen Arbeiten keine Präferenz von bestimmten Keimbahngenloki. Somit stärkt auch diese Arbeit die Hypothese, dass IVIG vornehmlich mit den variablen Regionen der schweren Ketten, welche den Keimbahngenloki 3-23 und 3-30 entstammen, interagiert. Antikörper dieser beiden Keimbahngenloki spielen in der Regulation des natürlichen Antikörperrepertoires eine besondere Rolle. Eine V-Region vermittelte Interaktion von IVIG mit membranständigen IgG-Rezeptoren, die in ihren schweren Ketten diese beiden Keimbangenloki nutzen, könnte zu einer Stimulation einer großen Anzahl von B-Zellen führen und somit die natürliche Hömostase des Antikörperrepertoires wieder herstellen und folglich die Bildung von Autoantikörpern unterdrücken. Dies wäre eine mögliche Erklärung für die immunmodulatorische Langzeitwirkung von IVIG auch in der Therapie des Kawasaki-Syndroms.","For the first time it was built up a Phage Display Libary for Antibodies of a patient diagnosed with Kawasaki Syndrom prior to the treatment with Intravenous Immunoglobulin (IVIG) and two month after to investigate the built up Antibody-Repertoire. With biopanning with IVIG I isolated those antibodies, which were bound intensivly to IVIG. Within the IVIG-selected Fab-Phages of the Phage Display Library prior to the treatment with IVIG 5 of 11 sequenzed Clones belong to the germlinesegment DP54/V3-7 of the germlinelocus V3-07 in there heavy chains. In the CD-Region of these heavy chains there was only one mutation. Supposingly these heavy chains were not selected by a specific stimulation of a single antigen, but by a non-specific stimulation of a superantigen, which binds besides the antigenbinding groove of a T-cell- Receptor. Unfortunately non of the Sequences have been similar to known antiendothelial antibodies, which was proofed in Gen-Databases. 5 of the resting 6 IVIG-selected Clones were using the Germline-Loki V3-23 and V3-30. Out of the Phage Display Library after treatment with IVIG I selected 10 clones by biopanning with IVIG. All but 3 were using also the Germline-Loki V3-23 and V3-30. Antibodies of these Germline-Loki are used in the regulation of the natural antibodierepertoire. So it might be possible, that IVIG stimulates via his V-Region IgG-Rezeptors of B-cells, which uses these Germline-Loki, to stimulate a large amount of B-cells. These B-cells are then responsible for a backregulation to the natural hömostase of the antibodierepertoire and surpresses the development of autoantibodies. These interaction might be responsible for the longterm immunmodularic results after the treatment with IVIG in Kawasaki-Syndrom.","https://refubium.fu-berlin.de/handle/fub188/12915||http://dx.doi.org/10.17169/refubium-17113","urn:nbn:de:kobv:188-fudissthesis000000007136-2","ger","http://www.fu-berlin.de/sites/refubium/rechtliches/Nutzungsbedingungen","600 Technik, Medizin, angewandte Wissenschaften::610 Medizin und Gesundheit","Klonierung und molekulare Charakterisierung humaner, monoklonaler Antikörper einer Patientin mit Kawasaki-Syndrom vor und nach Behandlung mit IVIG mittels kombinatorischer Phagen-Display-Bibliothek","Clonisation and moleculare characterisation of human. monoclonal antibodies of a patient with Kawasaki-Syndrom prior and after treatment with IVIG by combinatoric Phage-Display-Libary","Dissertation","free","open access","Text","Charité - Universitätsmedizin Berlin","FUDISS_derivate_000000011334","FUDISS_thesis_000000007136"